| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 螺原体的研究概述 | 第10-15页 |
| 1.1.1 螺原体的发现及分类 | 第10-12页 |
| 1.1.2 螺原体的基本生物学特性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 螺原体的分布及和致病性研究 | 第13-14页 |
| 1.1.4 中华绒螯蟹螺原体的发现与证实 | 第14-15页 |
| 1.2 免疫蛋白组学简述及柔膜体纲微生物研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 免疫蛋白组学简述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 柔膜体纲微生物免疫蛋白组学研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3 膜蛋白在螺原体侵染作用中机制的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 本论文研究的目的、内容、意义和技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 中华绒螯蟹螺原体抗原膜蛋白筛选 | 第22-32页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 菌液培养收集 | 第24页 |
| 2.2.2 总蛋白提取,膜蛋白、胞质蛋白分离 | 第24-25页 |
| 2.2.3 Bradford法蛋白测定 | 第25页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色、脱色过程 | 第25页 |
| 2.2.5 免疫沉淀法(IP) | 第25页 |
| 2.2.6 快速银染检测 | 第25-26页 |
| 2.2.7 抗原膜蛋白质谱鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 螺原体膜蛋白、胞质蛋白、螺原体总蛋白SDS-PAGE分析 | 第27页 |
| 2.3.2 免疫沉淀洗脱液银染比较 | 第27-28页 |
| 2.3.3 抗原膜蛋白LC-ESI-MS/MS分析 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 中华绒螯蟹螺原体ORF0313蛋白生物信息学分析、基因克隆、表达及纯化 | 第32-46页 |
| 3.1 材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 主要设备 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第32-34页 |
| 3.1.3 引物设计与合成 | 第34页 |
| 3.2 方法 | 第34-39页 |
| 3.2.1 生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 3.2.2 提取中华绒蜜蟹螺原体基因组DNA | 第35页 |
| 3.2.3 ORF313 PCR扩增 | 第35-36页 |
| 3.2.4 ORF0313与pSIMPLE-19 EcoRV/BAP克隆载体的连接 | 第36页 |
| 3.2.5 pSIMPLE-ORF0313连接产物的转化 | 第36页 |
| 3.2.6 菌液PCR鉴定阳性克隆、测序分析 | 第36页 |
| 3.2.7 点突变实验 | 第36-37页 |
| 3.2.8 双酶切及表达载体构建 | 第37-38页 |
| 3.2.9 重组蛋白的表达与鉴定 | 第38页 |
| 3.2.10 Ni-NTA Agarose亲和层析蛋白纯化 | 第38-39页 |
| 3.3 结果 | 第39-44页 |
| 3.3.1 生物信息学分析结果 | 第39-41页 |
| 3.3.2 313基因PCR扩增克隆鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.3 中华绒螯蟹ORF0313基因点突变 | 第42页 |
| 3.3.4 原核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.3.5 pET-0313重组质粒转化及单克隆菌落挑取 | 第43页 |
| 3.3.6 ORF0313重组蛋白的表达及纯化 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 ORF0313蛋白抗体制备、细胞定位及毒性试验 | 第46-55页 |
| 4.1 材料 | 第46-48页 |
| 4.1.1 主要设备 | 第46页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第46-48页 |
| 4.2 方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 313蛋白多克隆抗体制备 | 第48页 |
| 4.2.2 ORF0313蛋白多克隆抗体Western blot验证 | 第48页 |
| 4.2.3 313多克隆抗体纯化 | 第48-49页 |
| 4.2.4 313蛋白胶体金免疫透射电镜定位 | 第49页 |
| 4.2.5 中华绒螯蟹原代细胞培养 | 第49-50页 |
| 4.2.6 中华绒螯蟹血细胞毒性实验 | 第50页 |
| 4.3 结果 | 第50-53页 |
| 4.3.1 ORF0313重组蛋白多克隆抗体Western blot验证 | 第50-51页 |
| 4.3.2 纯化过ORF0313蛋白多克隆抗体对螺原体总蛋白Westernblot验证 | 第51页 |
| 4.3.3 蛋白ORF0313亚细胞定位 | 第51-53页 |
| 4.3.4 中华绒螯蟹血细胞毒性实验 | 第53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
