| 符号说明 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-35页 |
| 1.1 AIV的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 流感病毒概述 | 第17-19页 |
| 1.3 流感病毒的流行情况 | 第19-20页 |
| 1.3.1 西班牙流感大流行 | 第19页 |
| 1.3.2 亚洲流感大流行 | 第19页 |
| 1.3.3 香港流感大流行 | 第19-20页 |
| 1.3.4 俄国流感大流行 | 第20页 |
| 1.3.5 墨西哥流感大流行 | 第20页 |
| 1.4 AIV对人类的感染 | 第20-22页 |
| 1.4.1 H9亚型AIV对人类的感染 | 第21页 |
| 1.4.2 H5亚型AIV对人类的感染 | 第21页 |
| 1.4.3 H7亚型AIV对人类的感染 | 第21-22页 |
| 1.5 AIV的致病力和传播能力的影响因素 | 第22-24页 |
| 1.5.1 HA基因对AIV致病力的影响 | 第22-23页 |
| 1.5.2 聚合酶复合体（PB1、PB2、PA）对AIV致病力的影响 | 第23页 |
| 1.5.3 NS基因对流感病毒致病力的影响 | 第23-24页 |
| 1.5.4 M基因对流感病毒致病力的影响 | 第24页 |
| 1.6 AIV的传播方式 | 第24-26页 |
| 1.7 活禽市场中AIV存在情况 | 第26页 |
| 1.8 气溶胶 | 第26-34页 |
| 1.8.1 概念 | 第26-27页 |
| 1.8.2 气溶胶的特性 | 第27-28页 |
| 1.8.2.1 不稳定性 | 第27页 |
| 1.8.2.2 扩散的三维性 | 第27页 |
| 1.8.2.3 沉积气溶胶的再生性 | 第27-28页 |
| 1.8.2.4 感染的广泛性 | 第28页 |
| 1.8.3 微生物气溶胶的来源 | 第28页 |
| 1.8.4 病毒气溶胶的传播感染 | 第28-29页 |
| 1.8.5 病毒气溶胶的采样 | 第29-33页 |
| 1.8.5.1 采样的原则 | 第30页 |
| 1.8.5.2 采样介质 | 第30页 |
| 1.8.5.3 微生物气溶胶的采样仪器 | 第30-33页 |
| 1.8.6 气溶胶的检测 | 第33-34页 |
| 1.8.6.1 细胞培养法 | 第33页 |
| 1.8.6.2 分子检测方法 | 第33-34页 |
| 1.9 本实验的目的与意义 | 第34-35页 |
| 2 材料和方法 | 第35-46页 |
| 2.1 材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 病毒株及核酸 | 第35页 |
| 2.1.2 主要分子生物学试剂及试剂盒 | 第35页 |
| 2.1.3 主要实验溶液的配置 | 第35-36页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第36页 |
| 2.2 方法 | 第36-46页 |
| 2.2.1 病毒RNA提取 | 第36-37页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第37-38页 |
| 2.2.3 引物及探针设计 | 第38页 |
| 2.2.4 实时荧光定量RT-PCR反应条件 | 第38-39页 |
| 2.2.5 实时荧光定量RT-PCR反应条件的优化 | 第39-40页 |
| 2.2.5.1 引物和探针的浓度优化 | 第39页 |
| 2.2.5.2 循环参数优化试验 | 第39-40页 |
| 2.2.5.3 循环次数的优化 | 第40页 |
| 2.2.6 质粒标准品的制备 | 第40-43页 |
| 2.2.6.1 目的基因的扩增 | 第40-41页 |
| 2.2.6.2 DNA片段的纯化回收 | 第41页 |
| 2.2.6.3 连接T载体 | 第41-42页 |
| 2.2.6.4 连接产物转化感受态细胞 | 第42页 |
| 2.2.6.5 质粒提取 | 第42-43页 |
| 2.2.6.6 阳性质粒的含量的测定 | 第43页 |
| 2.2.7 标准曲线的建立 | 第43-44页 |
| 2.2.7.1 特异性试验 | 第43页 |
| 2.2.7.2 敏感性试验 | 第43-44页 |
| 2.2.7.3 重复性试验 | 第44页 |
| 2.2.8 H9亚型AIV病毒标准曲线的建立 | 第44页 |
| 2.2.9 活禽市场空气样品的采集和检测 | 第44-46页 |
| 2.2.9.1 样品采集 | 第44-45页 |
| 2.2.9.1.1 活禽市场样品采集 | 第44页 |
| 2.2.9.1.2 养殖场样品采集 | 第44-45页 |
| 2.2.9.2 样品处理 | 第45页 |
| 2.2.9.3 对样品进行检测 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-57页 |
| 3.1 H7N9亚型AIV实时荧光定量RT-PCR反应条件的优化 | 第46-47页 |
| 3.1.1 引物和探针浓度的优化 | 第46页 |
| 3.1.2 循环参数和次数的确定 | 第46-47页 |
| 3.1.3 基因片段的扩增和克隆 | 第47页 |
| 3.1.4 质粒浓度的测定 | 第47页 |
| 3.2 标准曲线的建立 | 第47-51页 |
| 3.2.1 H7和N9基因标准曲线的建立 | 第47-48页 |
| 3.2.2 特异性试验结果 | 第48-49页 |
| 3.2.3 敏感性试验结果 | 第49-50页 |
| 3.2.4 重复性试验结果 | 第50-51页 |
| 3.3 H9亚型AIV标准曲线的建立 | 第51-52页 |
| 3.3.1 H9亚型基因片段的扩增和克隆 | 第51-52页 |
| 3.3.2 H9亚型AIV病毒标准曲线的建立 | 第52页 |
| 3.4 临床样品检测结果 | 第52-57页 |
| 3.4.1 活禽市场空气样品检测结果 | 第52-55页 |
| 3.4.1.1 H7N9亚型AIV气溶胶检测结果 | 第52-53页 |
| 3.4.1.2 H9亚型AIV气溶胶检测结果 | 第53-55页 |
| 3.4.2 养殖场检测结果 | 第55-57页 |
| 3.4.2.1 H7N9亚型AIV检测结果 | 第55页 |
| 3.4.2.2 H9亚型AIV检测结果 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 本实验的目的和意义 | 第57页 |
| 4.2 H7N9亚型AIV实时荧光定量方法的建立 | 第57-58页 |
| 4.3 活禽市场上AIV气溶胶存在情况 | 第58-59页 |
| 4.4 养鸡场AIV气溶胶分布现状 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 5.1 H7N9亚型实时荧光定量检测方法的建立 | 第60页 |
| 5.2 活禽市场AIV检测结果 | 第60页 |
| 5.3 养鸡场AIV的检测结果 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-73页 |
| 附录 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第79页 |
