| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 抗生素及滥用抗生素的危害 | 第10-11页 |
| 1.1.1 抗生素的种类及作用 | 第10-11页 |
| 1.1.2 滥用抗生素的危害 | 第11页 |
| 1.2 抗生素替代产品的研究 | 第11-12页 |
| 1.3 抗菌肽的分类 | 第12-15页 |
| 1.3.1 按照来源分类 | 第12-13页 |
| 1.3.2 按照结构分类 | 第13-14页 |
| 1.3.3 抗菌肽的作用原理及优点 | 第14-15页 |
| 1.4 目前获取抗菌肽的方法 | 第15页 |
| 1.4.1 天然自然生物提取 | 第15页 |
| 1.4.2 人工合成 | 第15页 |
| 1.4.3 基因工程合成 | 第15页 |
| 1.5 基因工程技术生产抗菌肽的研究 | 第15-18页 |
| 1.5.1 大肠杆菌表达系统 | 第15-16页 |
| 1.5.2 毕赤酵母表达系统 | 第16-18页 |
| 1.6 论文研究目的及意义 | 第18页 |
| 1.7 本实验的研究内容 | 第18-20页 |
| 1.7.1 Mytichitin-CB抗菌肽的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.7.2 主要研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-26页 |
| 2.1.1 菌种、质粒和引物 | 第20-21页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.4 相关溶液的配制 | 第23-25页 |
| 2.1.5 主要培养基 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 试验技术路线 | 第26-27页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.3 感受态的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.4 转化大肠杆菌感受态细胞XL1-blue | 第29页 |
| 2.2.5 重组子的双酶切验证 | 第29-30页 |
| 2.2.6 抗菌肽Mytichitin-CB基因的原核表达和活性鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.7 Mytichitin-CB抗菌肽基因的真核表达 | 第32-35页 |
| 2.2.8 融合蛋白活性的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.9 融合蛋白的纯化和MIC测定 | 第36-37页 |
| 2.2.10 毕赤酵母发酵条件的优化 | 第37-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-60页 |
| 3.1 抗菌肽理化性质和结构分析 | 第38-41页 |
| 3.1.1 抗菌肽理化性质分析 | 第38页 |
| 3.1.2 Mytichitin-CB等电点分析 | 第38-39页 |
| 3.1.3 Mytichitin-CB疏水性分析 | 第39-40页 |
| 3.1.4 Mytichitin-CB的二级结构预测与分析 | 第40-41页 |
| 3.2 抗菌肽基因Mytichitin-CB的原核表达 | 第41-50页 |
| 3.2.1 目的基因的设计与合成 | 第41-42页 |
| 3.2.2 表达载体的构建 | 第42页 |
| 3.2.3 重组质粒的双酶切验证 | 第42-43页 |
| 3.2.4 重组质粒测序验证 | 第43-44页 |
| 3.2.5 转化子的诱导表达 | 第44-47页 |
| 3.2.6 融合蛋白的纯化 | 第47-48页 |
| 3.2.7 肠激酶切MBP-CB融合蛋白去除MBP标签 | 第48-49页 |
| 3.2.8 目的蛋白活性分析 | 第49-50页 |
| 3.3 抗菌肽基因Mytichitin-CB的真核表达 | 第50-60页 |
| 3.3.1 目的基因的设计也合成 | 第50-51页 |
| 3.3.2 表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.3 重组质粒的双酶切验证 | 第52页 |
| 3.3.4 重组质粒测序验证 | 第52-53页 |
| 3.3.5 质粒线性化 | 第53页 |
| 3.3.6 PCR筛选阳性转化子 | 第53-54页 |
| 3.3.7 转化子的诱导表达 | 第54页 |
| 3.3.8 抑菌试验 | 第54-55页 |
| 3.3.9 纯化试验 | 第55-56页 |
| 3.3.10 MIC测定 | 第56页 |
| 3.3.11 毕赤酵母发酵条件的优化 | 第56-60页 |
| 4 结论 | 第60-61页 |
| 4.1 抗菌肽Mytichitin-CB的基因设计与获取 | 第60页 |
| 4.2 表达载体的构建 | 第60页 |
| 4.3 原核表达系统 | 第60页 |
| 4.4 真核表达系统 | 第60页 |
| 4.5 发酵条件的优化 | 第60-61页 |
| 5 展望 | 第61-62页 |
| 6 参考文献 | 第62-68页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第68-69页 |
| 8 致谢 | 第69页 |
