| 缩略词表 | 第8-14页 |
| 摘要 | 第14-17页 |
| Abstract | 第17-19页 |
| 前言 | 第20-30页 |
| 1. 肿瘤有氧糖酵解 | 第20-23页 |
| 2. 有氧糖酵解酶 | 第23-24页 |
| 3. 磷酸甘油酸变位酶 | 第24-26页 |
| 3.1 PGAM的亚型 | 第24页 |
| 3.2 PGAM1与肿瘤 | 第24-25页 |
| 3.3 PGAM1的调控 | 第25-26页 |
| 3.4 PGAM1的靶向抑制剂研究 | 第26页 |
| 4. DNA损伤应答 | 第26-29页 |
| 4.1 同源重组 | 第27-29页 |
| 4.2 非同源末端连接 | 第29页 |
| 5. 本课题的研究目的及意义 | 第29-30页 |
| 研究方案 | 第30-32页 |
| 第一章 PGAM1调控DNA同源重组修复通路 | 第32-55页 |
| 1.1 引言 | 第32-33页 |
| 1.2 材料与方法 | 第33-42页 |
| 1.2.1 药品和试剂 | 第33页 |
| 1.2.2 质粒 | 第33页 |
| 1.2.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 1.2.4 细胞株及细胞培养 | 第34-35页 |
| 1.2.5 质粒扩增、抽提、纯化 | 第35页 |
| 1.2.6 质粒转染 | 第35-36页 |
| 1.2.7 稳定干扰株构建 | 第36-37页 |
| 1.2.8 基于稳定同位素氨基酸标记的细胞培养技术的蛋白质组学研究 | 第37-38页 |
| 1.2.9 蛋白免疫印迹 | 第38页 |
| 1.2.10 克隆形成 | 第38-39页 |
| 1.2.11 细胞凋亡检测 | 第39页 |
| 1.2.12 细胞周期检测 | 第39页 |
| 1.2.13 免疫荧光实验 | 第39-40页 |
| 1.2.14 彗星电泳(单细胞凝胶电泳实验) | 第40页 |
| 1.2.15 瞬时干扰 | 第40-41页 |
| 1.2.16 HR报告分析系统 | 第41页 |
| 1.2.17 NHEJ报告系统 | 第41页 |
| 1.2.18 统计学分析方法 | 第41-42页 |
| 1.3 结果 | 第42-53页 |
| 1.3.1 基于SILAC的蛋白质组学研究干扰PGAM1对细胞总蛋白水平的影响 | 第42-43页 |
| 1.3.2 干扰PGAM1选择性增强细胞对DNA损伤药物的敏感性 | 第43-48页 |
| 1.3.3 PGAM1参与调控同源重组修复通路 | 第48-53页 |
| 1.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第二章 PGAM1调控HR修复依赖其代谢酶活性 | 第55-76页 |
| 2.1 引言 | 第55-56页 |
| 2.2 材料与方法 | 第56-64页 |
| 2.2.1 药品与试剂 | 第56页 |
| 2.2.2 质粒 | 第56页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第56-57页 |
| 2.2.4 细胞株及细胞培养 | 第57页 |
| 2.2.5 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提 | 第57-58页 |
| 2.2.6 点突变试验 | 第58-59页 |
| 2.2.7 2-Phosphoglycerate检测 | 第59页 |
| 2.2.8 细胞代谢指标的检测 | 第59-60页 |
| 2.2.9 ATP检测 | 第60-61页 |
| 2.2.10 细胞外释放的乳酸检测 | 第61页 |
| 2.2.11 瞬时干扰 | 第61-62页 |
| 2.2.12 6PGD及PHGDH的酶活测定 | 第62页 |
| 2.2.13 细胞增殖(SRB法) | 第62-63页 |
| 2.2.14 NADPH/NADP~+检测 | 第63页 |
| 2.2.15 dNTP水平测定 | 第63页 |
| 2.2.16 统计方法 | 第63-64页 |
| 2.3 结果 | 第64-75页 |
| 2.3.1 PGAM1调控HR修复依赖于其代谢酶活功能 | 第64-69页 |
| 2.3.2 PGAM1通过磷酸戊糖旁路调控HR功能 | 第69-75页 |
| 2.4 讨论 | 第75-76页 |
| 第三章 PGAM1通过影响CtIP蛋白水平调控HR修复 | 第76-102页 |
| 3.1 引言 | 第76-77页 |
| 3.2 材料与方法 | 第77-83页 |
| 3.2.1 药品与试剂 | 第77页 |
| 3.2.2 质粒 | 第77页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第77-78页 |
| 3.2.4 细胞株及细胞培养 | 第78页 |
| 3.2.5 ssDNA形成荧光免疫染色测定 | 第78-79页 |
| 3.2.6 瞬时干扰 | 第79-80页 |
| 3.2.7 CtIP蛋白泛素化水平检测 | 第80-81页 |
| 3.2.8 细胞总RNA抽提 | 第81页 |
| 3.2.9 反转录 | 第81页 |
| 3.2.10 实时荧光定量PCR | 第81-82页 |
| 3.2.11 染色质免疫共沉淀 | 第82页 |
| 3.2.12 统计方法 | 第82-83页 |
| 3.3 结果 | 第83-101页 |
| 3.3.1 PGAM1通过调控CtIP蛋白水平影响DSBs末端切除效率 | 第83-88页 |
| 3.3.2 PGAM1通过调控dNTP代谢影响CtIP蛋白水平 | 第88-90页 |
| 3.3.3 PGAM1通过调节dNTP代谢影响CtIP蛋白稳定性 | 第90-96页 |
| 3.3.4 dNTP水平下调激活p53/p73通路 | 第96-101页 |
| 3.4 讨论 | 第101-102页 |
| 第四章 抑制PGAM1增敏乳腺癌对PARP抑制剂的敏感性 | 第102-117页 |
| 4.1 引言 | 第102-103页 |
| 4.2 材料和方法 | 第103-107页 |
| 4.2.1 药物及试剂 | 第103页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第103页 |
| 4.2.3 细胞株及细胞培养 | 第103-104页 |
| 4.2.4 体内抗肿瘤实验 | 第104页 |
| 4.2.5 动物实验中瘤组织蛋白提取 | 第104-105页 |
| 4.2.6 免疫组织化学 | 第105-106页 |
| 4.2.7 瘤组织中2-PG水平检测 | 第106页 |
| 4.2.8 统计方法 | 第106-107页 |
| 4.3 结果 | 第107-115页 |
| 4.3.1 干扰PGAM1增强BRCA野生型乳腺癌细胞对Olaparib的敏感性 | 第107-108页 |
| 4.3.2 Olaparib对PGAM1稳定干扰的BRCA野生型乳腺癌的体内抗肿瘤作用 | 第108-111页 |
| 4.3.3 联用PGAM1抑制剂增强BRCA野生型肿瘤对PARP抑制剂的敏感性 | 第111-115页 |
| 4.4 讨论 | 第115-117页 |
| 小结 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-130页 |
| 致谢 | 第130-132页 |
| 附录一 攻读学位期间发表的学术论文 | 第132-133页 |
