| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 星状病毒病原生物学 | 第11-13页 |
| 1.1.1 病原史 | 第11-13页 |
| 1.1.2 形态特点 | 第13页 |
| 1.1.3 理化性质 | 第13页 |
| 1.2 星状病毒的基因组 | 第13-14页 |
| 1.3 星状病毒的致病性 | 第14-16页 |
| 1.4 星状病毒流行病学 | 第16-18页 |
| 1.4.1 人星状病毒(HAstV) | 第16-17页 |
| 1.4.2 禽星状病毒(TAstV) | 第17页 |
| 1.4.3 猪星状病毒(PAstV) | 第17-18页 |
| 1.5 星状病毒检测方法 | 第18-21页 |
| 1.5.1 电镜检查 | 第19页 |
| 1.5.2 病毒分离 | 第19页 |
| 1.5.3 免疫学检测技术 | 第19-20页 |
| 1.5.4 逆转录聚合酶链式反应 | 第20-21页 |
| 1.5.5 逆转录环介导等温扩增 | 第21页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 猪星状病毒不同基因型单重PCR和多重PCR方法的建立 | 第23-57页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.4 琼脂糖凝胶 | 第23页 |
| 2.1.5 病毒RNA的提取和保存 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-36页 |
| 2.2.1 引物的设计 | 第24-30页 |
| 2.2.2 RNA反转录 | 第30页 |
| 2.2.3 单重PCR方法的建立 | 第30-33页 |
| 2.2.3.1 PAstV1单重PCR方法的建立与优化 | 第30页 |
| 2.2.3.2 PAstV2单重PCR方法的建立与优化 | 第30-31页 |
| 2.2.3.3 PAstV4单重PCR方法的建立与优化 | 第31页 |
| 2.2.3.4 PAstV5单重PCR方法的建立与优化 | 第31-32页 |
| 2.2.3.5 单重PCR特异性实验 | 第32页 |
| 2.2.3.6 单重PCR敏感性实验 | 第32页 |
| 2.2.3.7 单重PCR产物的回收与测序 | 第32-33页 |
| 2.2.4 二重PCR方法的建立 | 第33-34页 |
| 2.2.4.1 PAstV1和2型二重PCR方法的引物选择 | 第33页 |
| 2.2.4.2 PAstV4和5型二重PCR方法的引物选择 | 第33-34页 |
| 2.2.4.3 二重PCR方法的反应体系 | 第34页 |
| 2.2.4.4 二重PCR方法的退火温度优化 | 第34页 |
| 2.2.4.5 二重PCR特异性试验 | 第34页 |
| 2.2.4.6 二重PCR敏感性实验 | 第34页 |
| 2.2.5 PAstV1、2、4和5型四重PCR方法的建立 | 第34-36页 |
| 2.2.5.1 四重PCR方法的引物选择 | 第34-35页 |
| 2.2.5.2 四重PCR方法的建立 | 第35页 |
| 2.2.5.3 四重PCR方法的优化 | 第35页 |
| 2.2.5.4 四重PCR特异性试验 | 第35页 |
| 2.2.5.5 四重PCR敏感性实验 | 第35-36页 |
| 2.3 结果 | 第36-54页 |
| 2.3.1 建立PAstV1单重PCR方法结果 | 第36-38页 |
| 2.3.1.1 PAstV1型多组引物单重PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| 2.3.1.2 PAstV1型单重PCR方法的特异性试验结果 | 第37-38页 |
| 2.3.1.3 PAstV1型单重PCR方法的敏感性试验结果 | 第38页 |
| 2.3.1.4 PAstV1型单重PCR产物的鉴定结果 | 第38页 |
| 2.3.2 建立PAstV2单重PCR方法结果 | 第38-42页 |
| 2.3.2.1 PAstV2型多组引物单重PCR扩增结果 | 第38-40页 |
| 2.3.2.2 PAstV2型单重PCR方法的特异性试验结果 | 第40-41页 |
| 2.3.2.3 PAstV2型单重PCR方法的敏感性试验结果 | 第41页 |
| 2.3.2.4 PAstV2型单重PCR产物的鉴定结果 | 第41-42页 |
| 2.3.3 建立PAstV4单重PCR方法结果 | 第42-45页 |
| 2.3.3.1 PAstV4型多组引物单重PCR扩增结果 | 第42-43页 |
| 2.3.3.2 PAstV4型单重PCR方法的特异性试验结果 | 第43页 |
| 2.3.3.3 PAstV4型单重PCR方法的敏感性试验结果 | 第43-44页 |
| 2.3.3.4 PAstV4型单重PCR产物的鉴定结果 | 第44-45页 |
| 2.3.4 建立PAstV5单重PCR方法结果 | 第45-47页 |
| 2.3.4.1 PAstV5型多组引物单重PCR扩增结果 | 第45-46页 |
| 2.3.4.2 PAstV5型单重PCR方法的特异性试验结果 | 第46页 |
| 2.3.4.3 PAstV5型单重PCR方法的敏感性试验结果 | 第46-47页 |
| 2.3.4.4 PAstV5型单重PCR产物的鉴定结果 | 第47页 |
| 2.3.5 二重PCR方法的建立和优化结果 | 第47-51页 |
| 2.3.5.1 PAstV1型和2型二重PCR的退火温度的优化结果 | 第48页 |
| 2.3.5.2 PAstV4型和5型二重PCR的退火温度的优化结果 | 第48-49页 |
| 2.3.5.3 二重PCR特异性试验 | 第49页 |
| 2.3.5.4 二重PCR敏感性试验 | 第49-51页 |
| 2.3.6 四重PCR方法的建立和优化结果 | 第51-54页 |
| 2.3.6.1 四重PCR的引物浓度的优化结果 | 第51页 |
| 2.3.6.2 四重PCR的退火温度的优化结果 | 第51-52页 |
| 2.3.6.3 四重PCR特异性试验 | 第52页 |
| 2.3.6.4 四重PCR敏感性试验 | 第52-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-56页 |
| 2.5 小结 | 第56-57页 |
| 第三章 湖南地区猪星状病毒流行病学调查 | 第57-71页 |
| 3.1 材料 | 第57-60页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第57-59页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第59页 |
| 3.1.4 琼脂糖凝胶 | 第59页 |
| 3.1.5 病毒RNA的提取和保存 | 第59-60页 |
| 3.1.6 对样品的检测与结果分析 | 第60页 |
| 3.2 结果 | 第60-67页 |
| 3.2.1 二重PC艮的应用 | 第60页 |
| 3.2.2 猪星状病毒在各地检测猪场的感染分布情况 | 第60-61页 |
| 3.2.3 猪星状病毒在不同规模猪场的感染情况 | 第61-63页 |
| 3.2.4 猪星状病毒在所检测器官中的感染情况 | 第63-64页 |
| 3.2.5 猪星状病毒感染与季节的关系 | 第64-65页 |
| 3.2.6 猪星状病毒感染与仔猪年龄的关系 | 第65页 |
| 3.2.7 猪星状病毒感染与仔猪健康状况的关系 | 第65-66页 |
| 3.2.8 猪星状病毒感染在猪场内不同阶段感染情况 | 第66-67页 |
| 3.3 讨论 | 第67-69页 |
| 3.4 小结 | 第69-71页 |
| 第四章 湖南地区猪星状病毒毒株序列分析 | 第71-89页 |
| 4.1 材料 | 第71-74页 |
| 4.1.1 试验样品 | 第71-72页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第72-73页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第73-74页 |
| 4.1.4 琼脂糖凝胶 | 第74页 |
| 4.1.5 病毒RNA的提取和保存 | 第74页 |
| 4.2 方法 | 第74-76页 |
| 4.2.1 RNA反转录 | 第74页 |
| 4.2.2 引物的选择 | 第74-75页 |
| 4.2.3 PCR方法体系 | 第75页 |
| 4.2.4 PCR产物的回收与测序 | 第75-76页 |
| 4.2.5 序列分析 | 第76页 |
| 4.3 结果 | 第76-86页 |
| 4.3.1 湖南地区猪星状病毒1型毒株部分序列分析 | 第76-78页 |
| 4.3.2 湖南地区猪星状病毒2型毒株部分序列分析 | 第78-81页 |
| 4.3.3 湖南地区猪星状病毒4型毒株部分序列分析 | 第81-83页 |
| 4.3.4 湖南地区猪星状病毒5型毒株部分序列分析 | 第83-86页 |
| 4.4 讨论 | 第86-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 作者简介 | 第97页 |
