| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 γ-氨基丁酸简介 | 第8-10页 |
| 1.1.1 GABA结构与理化性质 | 第8-9页 |
| 1.1.2 GABA的生理功能及应用 | 第9页 |
| 1.1.3 GABA的生产方法 | 第9-10页 |
| 1.2 C. glutamicum简介和L-谷氨酸代谢 | 第10-11页 |
| 1.2.1 C. glutamicum和L-谷氨酸简介 | 第10-11页 |
| 1.2.2 L-谷氨酸的代谢 | 第11页 |
| 1.3 GABA的代谢 | 第11-12页 |
| 1.3.1 GABA在生物体中的合成 | 第11-12页 |
| 1.3.2 GABA在生物体中的分解 | 第12页 |
| 1.4 GABA研究现状 | 第12-13页 |
| 1.5 立题背景与意义 | 第13-14页 |
| 1.6 本论文研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要引物 | 第15-16页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.5 培养基 | 第17页 |
| 2.1.6 缓冲液配制 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-25页 |
| 2.2.1 分子操作 | 第18-19页 |
| 2.2.2 表达质粒和菌株的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.3 敲除质粒和菌株的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE蛋白表达分析 | 第22页 |
| 2.2.5 镍柱纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.6 酶学性质测定 | 第23页 |
| 2.2.7 C. glutamicum重组菌的发酵 | 第23-24页 |
| 2.2.8 发酵参数测定 | 第24页 |
| 2.2.9 基因转录水平分析 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-39页 |
| 3.1 C. glutamicum S9114重组菌产GABA研究 | 第25-30页 |
| 3.1.1 S9114/pJYW4gadB1-gadB2菌株产GABA研究 | 第25-27页 |
| 3.1.2 alaT敲除质粒及菌株的构建 | 第27-28页 |
| 3.1.3 S9114ΔalaT/pJYW4gadB1-gadB2产GABA研究 | 第28-29页 |
| 3.1.4 重组alaT敲除菌的RT-PCR分析 | 第29-30页 |
| 3.2 C. glutamicum ATCC13032重组菌分解途径研究 | 第30-32页 |
| 3.2.1 NCgl2515敲除质粒和敲除菌株的构建 | 第30-31页 |
| 3.2.2 SYN203重组菌的上罐发酵 | 第31-32页 |
| 3.3 GABA-T蛋白表达纯化及酶学性质研究 | 第32-39页 |
| 3.3.1 表达质粒和菌株的构建 | 第33页 |
| 3.3.2 蛋白表达与纯化 | 第33-34页 |
| 3.3.3 NCgl2515蛋白酶学性质的研究 | 第34-35页 |
| 3.3.4 GabT酶学性质的研究 | 第35-37页 |
| 3.3.5 NCgl2515和GabT蛋白异同对比 | 第37-39页 |
| 主要结论与展望 | 第39-41页 |
| 主要结论 | 第39页 |
| 展望 | 第39-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 附录： 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |
