| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 1,2,4-丁三醇的性质及应用 | 第7页 |
| 1.2 化学法生产1,2,4-丁三醇 | 第7-8页 |
| 1.3 生物法合成1,2,4-丁三醇 | 第8-11页 |
| 1.3.1 生物法合成1,2,4-丁三醇的途径 | 第8-10页 |
| 1.3.2 生物法合成1,2,4-丁三醇的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.4 分子伴侣概念及应用 | 第11-13页 |
| 1.5 本课题的立题意义与研究内容 | 第13-15页 |
| 1.5.1 立题意义 | 第13页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-22页 |
| 2.1 材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.2 工具酶 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要试剂及药品 | 第17页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第17页 |
| 2.1.5 培养基 | 第17页 |
| 2.2 方法 | 第17-22页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第17-19页 |
| 2.2.2 基因的敲除及验证 | 第19页 |
| 2.2.3 大肠杆菌染色体的提取 | 第19页 |
| 2.2.4 基因片段的PCR扩增 | 第19-20页 |
| 2.2.5 质粒的提取 | 第20页 |
| 2.2.6 重组质粒的构建 | 第20页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态的制备 | 第20页 |
| 2.2.8 重组菌的构建 | 第20页 |
| 2.2.9 质粒稳定性考察 | 第20页 |
| 2.2.10 目的蛋白表达情况测试 | 第20页 |
| 2.2.11 酶活测试方法 | 第20-21页 |
| 2.2.12 培养方法 | 第21页 |
| 2.2.13 生物量测定方法 | 第21页 |
| 2.2.14 代谢物的测定 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-41页 |
| 3.1 D-1,2,4-丁三醇合成重组菌代谢途径分析及旁路代谢基因的敲除 | 第22-28页 |
| 3.1.1 木糖分支代谢途径敲除对重组菌发酵性能的影响 | 第22-24页 |
| 3.1.2 2-酮-3-脱氧-木糖酸(KDX)分支代谢途径敲除对重组菌发酵性能的影响 | 第24-27页 |
| 3.1.3 木糖、KDX分支代谢途径同时缺失重组菌发酵性能分析 | 第27-28页 |
| 3.2 重组大肠杆菌中D-1,2,4-丁三醇合成关键酶yjhG、yqhD基因的过量表达 | 第28-35页 |
| 3.2.1 木糖酸脱水酶(yjhG)及醇脱氢酶(yqhD)基因的克隆及过表达载体的构建 | 第28-32页 |
| 3.2.2 强化yjhG基因表达对重组菌关键酶活力及BT合成的影响 | 第32-34页 |
| 3.2.3 过表达醇脱氢酶yqhD基因重组菌关键酶活力及发酵性能分析 | 第34-35页 |
| 3.3 重组菌中共表达分子伴侣强化D-1,2,4-丁三醇合成 | 第35-41页 |
| 3.3.1 共表达分子伴侣重组菌的构建 | 第36-37页 |
| 3.3.2 分子伴侣对D-1,2,4-丁三醇合成途径关键酶Xdh与Md1C的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.3 共表达分子伴侣重组菌的发酵性能分析 | 第38-41页 |
| 主要结论与展望 | 第41-43页 |
| 主要结论 | 第41页 |
| 展望 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48页 |
