| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 本文常用中英文缩写词 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-19页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-32页 |
| ·疑似病鸡、鸡胚、细胞 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要试剂与培养基的配制 | 第20-21页 |
| ·细胞培养所需溶液 | 第20页 |
| ·RNA提取所需溶液 | 第20-21页 |
| ·LB培养基 | 第21页 |
| ·感受态细胞制备所需溶液 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·J亚群禽白血病病毒的分离 | 第22-23页 |
| ·原代鸡胚成纤维细胞的制备 | 第22页 |
| ·接种CEF病料的制备 | 第22-23页 |
| ·ALV-J分离毒株的分离与培养 | 第23页 |
| ·ALV-J的鉴定及其序列分析 | 第23-28页 |
| ·ELISA方法检测p27群特异性抗原 | 第23页 |
| ·ALV-J的PCR特异性检测 | 第23-25页 |
| ·env基因的扩增与序列分析 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的胶回收与纯化 | 第26页 |
| ·目的基因与载体的链接 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的转化 | 第27页 |
| ·转化宿主菌 | 第27页 |
| ·重组质粒的阳性克隆的筛选 | 第27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒的提取和测序 | 第27-28页 |
| ·基因序列的分析 | 第28页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·阳性标准品的制备 | 第29页 |
| ·DF-1细胞RNA的提取 | 第29页 |
| ·基因组DNA的去除和cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| ·NALP3、MDA5和β-actin重组质粒的构建 | 第29页 |
| ·SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立 | 第29-30页 |
| ·反应条件和反应体系的优化 | 第29-30页 |
| ·标准曲线的建立 | 第30页 |
| ·溶解曲线的绘制 | 第30页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测AJV-HF211感染的DF-1细胞中NALP3和MDA5 mRNA的转录水平 | 第30-32页 |
| ·提取AJV-HF211感染DF-1细胞总RNA及反转录 | 第30页 |
| ·NALP3、MDA5和β-actin基因的实时荧光定量PCR检测 | 第30页 |
| ·数据分析 | 第30-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-41页 |
| ·疑似患鸡的主要组织病变 | 第32页 |
| ·鸡胚成纤维细胞分离ALV-J | 第32页 |
| ·p27群特异性抗原的检测结果 | 第32页 |
| ·ALV-J的RT-PCR检测与鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·AJV-HF211分离株env基因的扩增与遗传进化分析 | 第33-35页 |
| ·AJV-HF211分离株遗传进化分析 | 第35-36页 |
| ·PCR检测NALP3和MDA5的结果 | 第36页 |
| ·NALP3和MDA5重组质粒的构建和测序 | 第36页 |
| ·Real-time PCR反应条件的优化及标准曲线的建立 | 第36-37页 |
| ·阳性标准品的特异性 | 第37-38页 |
| ·AJV-HF211感染DF-1细胞后NALP3和MDA5 mRNA的转录水平 | 第38-41页 |
| ·DF-1细胞的RNA提取与浓度测定 | 第38页 |
| ·病毒感染细胞后不同时间内NALP3和MDA5基因的扩增曲线 | 第38页 |
| ·NALP3和MDA5受体的mRNA转录水平 | 第38-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
