| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| ·木质纤维素的化学组成与分子结构 | 第14-18页 |
| ·纤维素的空间架构 | 第15-16页 |
| ·半纤维的组成成分 | 第16-17页 |
| ·异质性的聚合物-木质素 | 第17-18页 |
| ·降解纤维素的主要微生物 | 第18-19页 |
| ·真菌类微生物 | 第18页 |
| ·细菌类微生物 | 第18-19页 |
| ·纤维素降解菌降解木质纤维素的主要策略 | 第19-22页 |
| ·游离的纤维素酶系统 | 第19-20页 |
| ·复合的纤维素酶系统 | 第20-21页 |
| ·细胞结合型的非复合体纤维素降解酶系统 | 第21-22页 |
| ·糖苷水解酶5家族(GH5)的相关研究进展 | 第22-27页 |
| ·GH5家族结构特征 | 第22-23页 |
| ·GH5家族亚家族分类标准 | 第23-24页 |
| ·GH5家族的催化机理 | 第24-27页 |
| ·立题依据 | 第27-28页 |
| 第二章 糖苷水解酶GH5-2亚家族的结构生物信息学分析 | 第28-38页 |
| ·材料与方法 | 第28-30页 |
| ·生物信息学数据网站 | 第28页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第28-29页 |
| ·GH5家族活性架构序列谱的绘制过程 | 第29页 |
| ·GH5-2亚家族系统发育树的构建 | 第29-30页 |
| ·ChCel5A的同源模建 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-36页 |
| ·GH5-2亚家族重要酶分子的性质统计分析 | 第30-31页 |
| ·ChCel5A的同源模建 | 第31-32页 |
| ·GH5-2亚家族酶分子表面电势分析 | 第32-33页 |
| ·GH5-2亚家族的系统发育树 | 第33-34页 |
| ·GH5-2亚家族活性架构序列谱 | 第34-36页 |
| ·小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 ChCel5A活性架构保守功能残基的突变及其功能的研究 | 第38-54页 |
| ·材料与方法 | 第38-45页 |
| ·菌株与质粒 | 第38页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第38-39页 |
| ·主要培养基与缓冲液 | 第39页 |
| ·ChCel5A的基因克隆 | 第39-41页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)异源表达突变蛋白及亲和层析 | 第41-43页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第43页 |
| ·内切纤维素酶活力测定 | 第43-44页 |
| ·荧光辅助糖电泳(FACE)表征产物谱的变化 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-52页 |
| ·ChCel5A的活性架构中保守氨基酸的功能分析 | 第45-46页 |
| ·ChCel5A质粒的构建和突变 | 第46-47页 |
| ·ChCel5A中N165、Y227的定点突变 | 第47页 |
| ·N165A、Y227A突变质粒的验证 | 第47-48页 |
| ·突变蛋白N165A、Y227A的内切纤维素酶活力测定 | 第48-49页 |
| ·N165A和Y227A水解RAC的产物谱分析 | 第49-51页 |
| ·WT、N165A以及Y227A水解RAC的产物谱模式图绘制 | 第51-52页 |
| ·小结与讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 ChCel5A活性架构中芳香族氨基酸的突变及其功能分析 | 第54-66页 |
| ·材料与方法 | 第54-57页 |
| ·菌株与质粒 | 第54页 |
| ·仪器与试剂 | 第54-55页 |
| ·主要培养基 | 第55页 |
| ·基因克隆 | 第55页 |
| ·大肠杆菌DH5α异源表达突变蛋白 | 第55页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第55-56页 |
| ·内切纤维素酶活力的测定 | 第56页 |
| ·pNPC酶活力的测定 | 第56页 |
| ·突变蛋白催化动力学K_m、K_(cat)的测定 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-63页 |
| ·活性架构中突变位点的功能分析与预测 | 第57-58页 |
| ·W61Y、Y203W的定点突变 | 第58页 |
| ·W61Y和Y203W突变质粒的验证 | 第58-59页 |
| ·突变蛋白W61Y和Y203W的表达和纯化 | 第59-60页 |
| ·突变蛋白W61Y和Y203W的内切纤维素酶活力测定 | 第60页 |
| ·pNPC酶活力的测定 | 第60-61页 |
| ·突变蛋白W61Y、Y203W的催化动力学常数测定 | 第61-62页 |
| ·利用FACE分析W61Y、Y203W水解CMC的产物谱变化 | 第62-63页 |
| ·小结与讨论 | 第63-66页 |
| 第五章 荧光光谱法测定酶活性架构中亚位点氨基酸与底物的结合力 | 第66-82页 |
| ·材料与方法 | 第66-70页 |
| ·主要试剂和设备 | 第66-67页 |
| ·酶分子的异源表达和RAC底物的制备 | 第67页 |
| ·内切纤维素酶活力和动力学参数的测定 | 第67页 |
| ·荧光体与底物pNP、pNPC、CMC以及RAC的荧光光谱测定 | 第67-70页 |
| ·结果与分析 | 第70-81页 |
| ·多点结合动力学的判断和单点结合区间的确定 | 第70-71页 |
| ·ChCel5A活性架构中亚位点氨基酸与不同底物的结合常数 | 第71-74页 |
| ·TrCel5A和TrCel12A与底物CMC的荧光光谱 | 第74-75页 |
| ·温度对于TrCel12A-E200Q与CMC荧光光谱的影响 | 第75-77页 |
| ·荧光光谱直观地表征pNP类底物的局限性 | 第77-78页 |
| ·荧光光谱定量地表征pNP类底物的局限性 | 第78-79页 |
| ·以RAC为底物的荧光光谱初探 | 第79-81页 |
| ·小结与讨论 | 第81-82页 |
| 全文总结与展望 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第94-95页 |
| 附件 | 第95页 |
