| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·PI3K/AKT 信号转导通路在恶性肿瘤中的研究进展 | 第11-13页 |
| ·PI3K 基因 | 第11页 |
| ·AKT 基因 | 第11-12页 |
| ·PI3K/AKT 信号转导通路在乳腺癌中的研究现状 | 第12-13页 |
| ·基因治疗 | 第13-18页 |
| ·基因治疗的概念 | 第13页 |
| ·基因治疗的分类 | 第13-14页 |
| ·RNA 干扰技术（RNA interference，RNAi） | 第14-17页 |
| ·微RNA 技术（microRNA） | 第17-18页 |
| ·乳腺癌的基因与化疗的联合治疗 | 第18-19页 |
| ·乳腺癌的常用化疗药物：紫杉醇 | 第18-19页 |
| ·乳腺癌的基因与化疗的联合治疗 | 第19页 |
| ·本论文工作的提出 | 第19-21页 |
| 第二章 RNAi 抑制P13Kp85α蛋白活性对人乳腺癌细胞系MCF-7 生长抑制的体外研究 | 第21-41页 |
| ·引言 | 第21-22页 |
| ·实验部分 | 第22-28页 |
| ·仪器和试剂 | 第22-23页 |
| ·PI3kp85αsiRNA 靶序列的选择与合成 | 第23页 |
| ·细胞培养及实验分组 | 第23页 |
| ·基因转染 | 第23页 |
| ·Realtime PCR 检测P13Kp85 mRNA 的表达 | 第23-24页 |
| ·Western blot 检测相关蛋白表达 | 第24-25页 |
| ·免疫荧光检测蛋白原位表达 | 第25-26页 |
| ·MTT 法分析细胞增殖活性 | 第26页 |
| ·流式细胞技术仪分析细胞周期 | 第26页 |
| ·Anexin V 检测细胞凋亡比例变化 | 第26页 |
| ·Transwell 检测体外侵袭 | 第26-27页 |
| ·统计学处理 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-38页 |
| ·Realtime PCR 检测RNA 干涉后目的基因的表达 | 第28-30页 |
| ·Western blot 观察RNAi 后相关蛋白表达的变化 | 第30-32页 |
| ·免疫荧光检测转染P13KP85αsiRNA 后蛋白表达变化 | 第32-33页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖活性 | 第33-34页 |
| ·Anexin V 检测细胞凋亡 | 第34-35页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期 | 第35-36页 |
| ·Transwell 体外侵袭实验 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 RNAi 抑制AKT 蛋白活性抑制MCF-7 人乳腺癌细胞生长的体外研究 | 第41-58页 |
| ·引言 | 第41-42页 |
| ·实验部分 | 第42-45页 |
| ·仪器和试剂 | 第42-43页 |
| ·AKT siRNA 靶序列的选择与合成 | 第43页 |
| ·细胞培养及实验分组 | 第43页 |
| ·基因转染 | 第43页 |
| ·Realtime PCR 检测AKT1 mRNA 的表达 | 第43页 |
| ·Western blot 检测蛋白表达 | 第43-44页 |
| ·免疫荧光 | 第44页 |
| ·MTT 法分析细胞增殖活性 | 第44页 |
| ·流式细胞技术仪分析细胞周期 | 第44页 |
| ·Anexin V 检测细胞凋亡 | 第44页 |
| ·Transwell 体外侵袭实验 | 第44页 |
| ·统计学分析处理数据 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-55页 |
| ·Realtime PCR 检测RNA 干涉后目的基因的表达 | 第45-47页 |
| ·Western blot 观察相关蛋白表达的变化 | 第47-49页 |
| ·免疫荧光法检测转染AKT siRNA 后蛋白表达变化 | 第49-51页 |
| ·MTT 法分析细胞增殖活性 | 第51页 |
| ·Anexin V 检测细胞凋亡 | 第51-52页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期 | 第52-53页 |
| ·Transwell 体外侵袭实验 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 RNAi 靶向AKT1、P13KP85α联合基因治疗抑制乳腺癌MCF-7 细胞增殖的体外研究 | 第58-73页 |
| ·引言 | 第58-59页 |
| ·实验部分 | 第59-62页 |
| ·仪器和试剂 | 第59-60页 |
| ·细胞培养与实验分组 | 第60页 |
| ·基因转染 | 第60页 |
| ·Realtime PCR 检测P13Kp85α、AKT1 m RNA 的表达 | 第60页 |
| ·Western blot 检测相关蛋白表达 | 第60页 |
| ·MTT 法分析细胞增殖活性 | 第60-61页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期 | 第61页 |
| ·2-D Matrigel 基质生长实验 | 第61页 |
| ·3-D Matrigel 基质生长实验 | 第61页 |
| ·统计学处理 | 第61-62页 |
| ·结果 | 第62-70页 |
| ·腺病毒转染效率测定 | 第62页 |
| ·Realtime PCR 检测应用RNAi 后目的基因mRNA 的表达 | 第62-63页 |
| ·Western blot 检测应用RNAi 后目的基因及其相关因子的蛋白表达 | 第63-65页 |
| ·MTT 法分析细胞增殖活性 | 第65-66页 |
| ·流式细胞术分析周期 | 第66-67页 |
| ·2-D Matrigel 基质生长实验 | 第67-68页 |
| ·3-D Matrigel 基质生长实验 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 第五章 紫杉醇在人乳腺癌细胞系MCF-7 中IC50 的测定 | 第73-81页 |
| ·引言 | 第73-74页 |
| ·实验部分 | 第74-76页 |
| ·仪器和试剂 | 第74-75页 |
| ·细胞培养与紫杉醇溶液的配置 | 第75页 |
| ·实验分组 | 第75页 |
| ·MTT 法测定紫杉醇在人乳腺癌细胞系MCF-7 中IC50 的测定 | 第75页 |
| ·统计学方法 | 第75-76页 |
| ·结果 | 第76-78页 |
| ·不同浓度梯度紫杉醇溶液对人乳腺癌细胞MCF-7 的抑制作用 | 第76-77页 |
| ·紫杉醇在人乳腺癌细胞系MCF-7 细胞中的IC50 测定 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| ·本章小结 | 第80-81页 |
| 第六章 miRNA-21抑制剂联合紫杉醇抑制人乳腺癌细胞系MCF-7生长的体外研究 | 第81-100页 |
| ·引言 | 第81-82页 |
| ·实验部分 | 第82-86页 |
| ·仪器和试剂 | 第82-83页 |
| ·细胞培养与实验分组 | 第83-84页 |
| ·MTT 法分析细胞增殖活性 | 第84页 |
| ·Anexin V 检测细胞凋亡 | 第84页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期 | 第84页 |
| ·Transwell 法检测细胞侵袭能力 | 第84页 |
| ·Western blot 检测相关蛋白的表达 | 第84-85页 |
| ·统计学方法 | 第85-86页 |
| ·结果 | 第86-96页 |
| ·细胞增殖活性的分析 | 第86-87页 |
| ·Anexin V 检测细胞凋亡 | 第87-89页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期 | 第89-91页 |
| ·Transwell 法检测细胞体外侵袭能力 | 第91-93页 |
| ·Western blot 检测相关蛋白的表达 | 第93-96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| ·本章小结 | 第99-100页 |
| 第七章 结论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
