| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一部分 研究背景 | 第9-45页 |
| 一、 CDK5基因及其研究进展 | 第9-19页 |
| （一） CDK家族简介 | 第9-12页 |
| （二） CDK5/p35及其研究进展 | 第12-19页 |
| 二、 TGF-β与癌症相关机制研究进展 | 第19-22页 |
| （一） TGF-β简介 | 第19-20页 |
| （二） TGF-β1调控癌症进程的机制 | 第20-22页 |
| 三、 乳腺癌恶性转移相关机制研究进展 | 第22-29页 |
| （一） 乳腺癌转移机制的研究进展 | 第22-28页 |
| （二） 转移相关因子的研究简介 | 第28-29页 |
| 四、 上皮-间质转化过程 | 第29-36页 |
| （一） EMT的分类与分子标志 | 第30-33页 |
| （二） EMT与癌症转移 | 第33-34页 |
| （三） EMT与乳腺癌 | 第34-35页 |
| （四） TGF-β1与EMT | 第35-36页 |
| 五、 FAK 基因及其研究进展 | 第36-43页 |
| （一） FAK的结构 | 第37-38页 |
| （二） FAK的功能 | 第38-43页 |
| 六、 本论文研究的内容和意义 | 第43-45页 |
| （一） 立题依据 | 第43页 |
| （二） 本论文的研究内容和意义 | 第43-45页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第45-66页 |
| 一、 实验材料 | 第45-47页 |
| （一） 质粒 | 第45-46页 |
| （二） 蛋白质和抗体 | 第46页 |
| （三） 哺乳动物细胞系 | 第46页 |
| （四） 试剂 | 第46-47页 |
| 二、 实验方法 | 第47-66页 |
| Ⅰ. 分子生物学实验方法 | 第47-52页 |
| （一） 分子克隆 | 第47页 |
| （二） DNA的琼脂糖电泳 | 第47页 |
| （三） 质粒大量制备的方法 | 第47-49页 |
| （四） 哺乳动物细胞总RNA的提取 | 第49-50页 |
| （五） 逆转录 | 第50-51页 |
| （六） PCR和荧光适时定量realtime PCR | 第51-52页 |
| Ⅱ. 细胞生物学实验方法 | 第52-59页 |
| （一） 哺乳动物细胞系的培养 | 第52-53页 |
| （二） 真核生物细胞的瞬时转染 | 第53-55页 |
| （三） 慢病毒转染技术 | 第55-57页 |
| （四） MTT细胞活性检测实验 | 第57-58页 |
| （五） 肿瘤细胞迁移和侵袭实验 | 第58-59页 |
| （六） 裸鼠实验 | 第59页 |
| Ⅲ. 蛋白的生物化学实验方法 | 第59-65页 |
| （一） 细胞总蛋白的提取 | 第59-60页 |
| （二） 组织蛋白的提取 | 第60页 |
| （三） SDS-PAGE电泳和Western Blotting | 第60-62页 |
| （四） 蛋白质免疫共沉淀实验（CoIP） | 第62-64页 |
| （五） 免疫荧光实验（IF） | 第64-65页 |
| （六） 免疫组化实验（IHC） | 第65页 |
| Ⅳ. 统计分析 | 第65-66页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第66-85页 |
| 一、 CDK5和p35在乳腺癌细胞系和乳腺癌组织中的表达水平 | 第66-69页 |
| （一） CDK5和p35在乳腺癌细胞系中高表达 | 第66页 |
| （二） CDK5和p35在乳腺癌组织中高表达 | 第66-67页 |
| （三） CDK5的表达水平与乳腺癌预后相关 | 第67-69页 |
| 二、 CDK5和p35在TGF-β1诱导的EMT过程中表达上调，并伴随CDK5的激酶活性增强 | 第69-73页 |
| （一） TGF-β1诱导乳腺表皮细胞发生EMT | 第69-71页 |
| （二） 在TGF-β1诱导发生EMT过程中CDK5和p35表达上调，并伴随CDK5的激酶活性增强 | 第71-73页 |
| 三、 干涉CDK5的表达抑制TGF-β1诱导的EMT发生 | 第73-76页 |
| 四、 干涉CDK5的表达或抑制CDK5的激酶活性影响乳腺癌细胞的功能 | 第76-81页 |
| （一） 干涉CDK5的表达或抑制CDK5的激酶活性抑制乳腺癌细胞的能动性 | 第76-78页 |
| （二） 干涉CDK5表达或抑制CDK5激酶活性对乳腺癌EMT的作用 | 第78-80页 |
| （三） 干涉CDK5的表达抑制裸鼠体内肿瘤的形成 | 第80-81页 |
| 五、 CDK5通过磷酸化FAK第732位丝氨酸影响乳腺癌细胞系的功能 | 第81-83页 |
| 六、 干涉CDK5的表达影响细胞骨架的重塑 | 第83页 |
| 七、 CDK5、p35和FAK共存于一个蛋白复合物中 | 第83-85页 |
| 第四部分 讨论 | 第85-90页 |
| 一、 CDK5与EMT | 第85-86页 |
| 二、 CDK5、TGF-β1与癌症恶化转移 | 第86-87页 |
| 三、 CDK5、FAK与癌症恶化转移 | 第87-90页 |
| 主要结论和创新点 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 附录 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第107页 |
