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应用RNAi技术分析生长抑素及其受体对小鼠支持细胞和牛颗粒细胞凋亡与类固醇激素发生的调节作用

摘要第1-10页
Abstract第10-13页
Abbreviations第13-14页
Chapter 1. Introduction第14-21页
   ·Somatostatin and its signaling第14-15页
   ·Somatostatin and Testis第15-16页
   ·Somatostatin and FSH in testis第16-17页
   ·Somatostatin receptor 2 on Granulosa cell第17-18页
   ·Interaction of FSH with SSTR2 in the ovary第18页
   ·Constitutive activity of SSTR2 and SSTR5第18-20页
   ·Conclusion and hypothesis第20-21页
Chapter 2 Somatostatin and its receptors: functional regulation in the development ofmice Sertoli cells第21-39页
   ·Material and Methods第21-27页
     ·Animals第21页
     ·Chemicals第21页
     ·Cell Isolation and Culture第21-23页
     ·RNA extraction and Real-time PCR第23-24页
     ·Immunohistochemistry(IHC)of somatostatin receptors in mice testes第24-25页
     ·Immunocytochemistry第25页
     ·cAMP measurement第25-26页
     ·Cell Cycle Analysis第26页
     ·Apoptotic activity第26页
     ·Western Blot analysis第26-27页
     ·Statistical analysis第27页
     ·Results第27-35页
       ·Expression of SSTR receptors第27-28页
       ·The expression of somatostatin receptors subtypes in different developmental stages of Sertoh cells第28-31页
       ·Forskolin-induced intracellular cAMP accumulation in SRIF14 treated-mice Sertoli cells第31页
       ·Homologous regulation of SRIF receptors第31-33页
       ·SRIF14 blocked cellular growth in mice Sertoli cells第33页
       ·SRIF increased apoptotic cells in mice Sertoli cell culture第33-34页
       ·Cell cycle and apoptotic protein expressions第34-35页
       ·SRIF14 down regulated the igfl and kitl mRNA expression in mice Sertoli cells第35页
     ·Discussion第35-39页
Chapter 3. Constitutive activation of Somatostatin receptor 2 and 5 and their interactionwith follicle-stimulating hormone in regulating immature mouse Sertoli cells apoptosis第39-51页
   ·Material and Methods第39-44页
       ·Isolation of mice Sertoli cells (SCs)第39-40页
     ·Construction of recombinant vectors and transfection第40-41页
     ·Quantitative Polymerase chain reaction第41-42页
     ·cAMP measurements第42页
     ·Assessment of cell Apoptosis第42-43页
     ·Western blot第43页
     ·Statistical analysis第43-44页
   ·Results第44-48页
     ·Selective knock down of SSTR2 and SSTR5 in mouse SCs第44-45页
     ·Selective knockdown of SSTR2 and SSTR5 regulates ERK1/ERK2 signaling第45-46页
     ·SSTR2 and SSTR5 are important for their constitutive and FSH-induced regulation on SCs apoptosis第46-47页
     ·Effect of selective knockdown of SSTR2 and SSTR5 on basal and FSH-induced apoptotic regulatory proteins第47-48页
   ·Discussion第48-51页
Chapter 4. Constitutive and follicle-stimulating hormone-induced action of somatostatinreceptor-2 on regulation of apoptosis and steroidogenesis in bovine granulosa cells第51-68页
   ·Material and Methods第51-56页
     ·Isolation and culture of bovine GCs第51-52页
     ·Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) for SSTR2 expression第52页
     ·Construction and transfection of recombinant ssRNA-1 and ssRNAi-2 vectors for SSTR2 and experimental design第52-53页
     ·Real time PCR for SSTR2 and associative genes第53-54页
     ·Measurement of estradiol and progesterone levels第54页
     ·Intracellular cAMP measurement第54页
     ·Cell apoptosis and proliferation detection第54-55页
     ·Western blot assay第55-56页
     ·Statistical analysis第56页
   ·Results第56-64页
     ·Expression of SSTR2 in bovine GCs第56页
     ·Transfection efficiency of recombinant vectors and expression in bovine GCs第56-58页
     ·Follicle-stimulating hormone(FSH)regulated the SSTR2 protein expression in bovine GCs第58-59页
     ·Treatment with FSH augmented progesterone production decreased apoptosis and increased cell proliferation in ssRNAi-2 transfected cells第59-62页
     ·SSTR2 silencing increased basal and FSH-induced progesterone production第62-64页
   ·Discussion第64-68页
5 Conclusion and Future Prospects第68-70页
6 References第70-79页
7. List of Figures第79-81页
8 List of Tables第81-82页
9 Acknowledgement第82-86页
10 Scientific Contributions第86-88页

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