乙型脑炎病毒感染U251细胞microRNA表达谱的研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 縮略语表(Abbreviation) | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| ·乙型脑炎病毒简介 | 第11-16页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·乙型脑炎的流行病学 | 第11-12页 |
| ·JEV的病原学特征 | 第12-13页 |
| ·病毒的基因结构和功能 | 第13-14页 |
| ·病毒的理化特性 | 第14页 |
| ·病毒复制 | 第14-15页 |
| ·致病机理 | 第15-16页 |
| ·miRNA研究进展 | 第16-21页 |
| ·miRNA的产生 | 第16-17页 |
| ·miRNA的作用方式 | 第17-18页 |
| ·miRNA与病毒 | 第18-19页 |
| ·病毒编码的miRNA | 第19页 |
| ·miRNA的研究方法 | 第19-21页 |
| 2 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·毒株、菌株及细胞系 | 第22页 |
| ·质粒 | 第22页 |
| ·主要药品及试剂 | 第22-23页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第23页 |
| ·主要缓冲液(溶液)及其配制 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-35页 |
| ·病毒感染 | 第24页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·RNA质量鉴定 | 第25页 |
| ·solexa高通量测序 | 第25-26页 |
| ·小RNA的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| ·miRNA的验证 | 第27-28页 |
| ·靶基因的获得 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的构建 | 第29-31页 |
| ·突变体报告质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·双荧光素酶报告实验 | 第32页 |
| ·miRNA转染 | 第32-33页 |
| ·病毒基因的qPCR检测 | 第33页 |
| ·Western blot检测 | 第33-34页 |
| ·空斑实验 | 第34页 |
| ·统计学方法 | 第34-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-47页 |
| ·RNA样品的准备 | 第35-36页 |
| ·深度测序结果 | 第36-39页 |
| ·数据统计 | 第36页 |
| ·sRNA的长度分布及首位碱基偏向性 | 第36-38页 |
| ·差异表达的miRNA | 第38-39页 |
| ·miRNA的qPCR验证 | 第39页 |
| ·miRNA与病毒的互作 | 第39-47页 |
| ·靶向JEV基因组的miRNA的预测 | 第39-40页 |
| ·miRNA靶标的构建 | 第40-42页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测 | 第42-43页 |
| ·miR-487b作用位点的确定 | 第43-44页 |
| ·miR-487b下调病毒RNA水平 | 第44-45页 |
| ·miR-487b抑制病毒蛋白表达 | 第45-46页 |
| ·miR-487b降低病毒滴度 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-50页 |
| ·侵染细胞和研究方法的选择 | 第47页 |
| ·miRNA对天然免疫的调节 | 第47-48页 |
| ·JEV编码的miRNA | 第48-49页 |
| ·miRNA对病毒的抑制作用 | 第49页 |
| ·miRNA应用于动物实验 | 第49-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-70页 |
