| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 前言 | 第12-20页 |
| 1 猪附红细胞体病的概述 | 第12页 |
| 2 猪附红细胞体病的流行特点及防治 | 第12-13页 |
| 3 猪附红细胞体的病原特征及归属 | 第13-14页 |
| 4 猪附红细胞体病的诊断技术 | 第14-15页 |
| ·病原体观察 | 第14页 |
| ·间接血凝试验 | 第14页 |
| ·聚合酶链反应 | 第14页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第14-15页 |
| 5 PCR-ELISA检测技术简介 | 第15-17页 |
| ·探针杂交标记法 | 第15-16页 |
| ·PCR扩增标记法 | 第16-17页 |
| 6 PCR-ELISA检测技术的应用 | 第17-19页 |
| ·在病原体检测中的应用 | 第17-18页 |
| ·在支原体检测中的应用 | 第18页 |
| ·在其他领域的应用 | 第18-19页 |
| 7 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-29页 |
| 1 材料 | 第20-23页 |
| ·试验样本 | 第20页 |
| ·载体和宿主菌株 | 第20页 |
| ·工具酶、试剂盒和其它试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·主要试剂与培养基 | 第21-23页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所需试剂 | 第21页 |
| ·转化感受态所需试剂 | 第21页 |
| ·蓝白斑筛选所需试剂及培养基 | 第21-22页 |
| ·PCR-ELISA所需试剂 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-29页 |
| ·猪附红细胞体OxaA膜蛋白基因的鉴定 | 第23-26页 |
| ·引物设计及合成 | 第23页 |
| ·模板DNA的提取 | 第23页 |
| ·目的基因的PCR扩增与最佳退火温度筛选 | 第23页 |
| ·PCR产物的纯化与回收 | 第23-24页 |
| ·PMD-18T-Ms232重组克隆质粒的构建 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25页 |
| ·克隆质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·克隆质粒的鉴定 | 第26页 |
| ·猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立 | 第26-29页 |
| ·PCR-ELISA引物设计及PCR扩增 | 第26页 |
| ·链霉亲和素最佳包被浓度与AKP标记抗地高辛抗体最佳稀释度的筛选 | 第26-27页 |
| ·最佳封闭条件的筛选 | 第27页 |
| ·最佳显色时间的筛选 | 第27页 |
| ·PCR扩增最佳循环数的确定 | 第27页 |
| ·PCR-ELISA阴阳判定标准的确立 | 第27-28页 |
| ·特异性试验 | 第28页 |
| ·敏感性试验 | 第28页 |
| ·重复性试验 | 第28页 |
| ·临床样本检测 | 第28-29页 |
| 结果 | 第29-39页 |
| 1 PCR扩增结果 | 第29页 |
| 2 目的基因克隆质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| 3 测序结果分析 | 第30-31页 |
| 4 链霉亲和素与AKP标记抗地高辛抗体最佳浓度的筛选 | 第31-32页 |
| 5 最佳封闭条件的筛选 | 第32页 |
| 6 最佳显色时间的筛选 | 第32-33页 |
| 7 PCR扩增最佳循环数的确定 | 第33-34页 |
| 8 PCR-ELISA阴阳判定标准的确立 | 第34页 |
| 9 特异性试验 | 第34-35页 |
| 10 敏感性试验 | 第35-37页 |
| 11 重复性试验 | 第37-38页 |
| 12 临床样本检测 | 第38-39页 |
| 讨论 | 第39-43页 |
| 1 PCR-ELISA方法检测猪附红细胞体的适用及改良 | 第39-40页 |
| 2 建立PCR-ELISA检测方法的思路和策略 | 第40-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简介 | 第50-51页 |
| 在研期间发表论文 | 第51页 |
