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海马齿全长cDNA文库构建及耐盐相关基因的克隆

摘要第1-5页
Abstract第5-7页
目录第7-9页
1 前言第9-30页
   ·我国土地盐碱化现状及耐盐植物的分布第9-10页
     ·我国土地盐碱化的现状第9-10页
     ·我国耐盐植物的分布第10页
   ·盐生植物的分类和盐胁迫对植物的伤害机理第10-11页
     ·我国盐生植物的类型第10页
     ·盐胁迫对植物的伤害机理第10-11页
   ·盐生植物的耐盐机理第11-16页
     ·盐生植物的避盐机理第12-13页
     ·离子在细胞水平上的区隔化第13-14页
     ·渗透调节在植物耐盐中的作用机理第14-15页
     ·耐盐植物的其他抗盐机理第15-16页
   ·盐生植物对盐渍化土壤的改良第16-17页
   ·植物耐盐基因工程的研究第17-20页
     ·耐盐相关蛋白和酶的基因工程第17-18页
     ·目前已经克隆的耐盐基因及相关元件第18-20页
   ·甜菜碱的耐盐机理和研究进展第20-22页
     ·甜菜碱的生理功能第20-21页
     ·甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)的研究进展第21-22页
   ·盐生植物海马齿的研究进展第22-23页
   ·全长cDNA文库的构建方法第23-27页
     ·CAPture法第23-24页
     ·Oligo-capping法第24页
     ·Cap-trapper法第24-25页
     ·Cap-jumping法第25页
     ·SMART(Switching Mechanism At 5’end of RNA Transcript method)法第25-27页
   ·转录组的研究意义与转录组差异分析-Solexa(Digital Gene Expression-Tagprofiling)第27页
   ·半定量PCR方法的原理和应用第27页
   ·本研究的目的和意义第27-29页
   ·本研究的技术路线第29-30页
2 材料与方法第30-51页
   ·材料与试剂第30-33页
     ·海马齿植物材料第30页
     ·主要仪器第30页
     ·生化试剂与工程菌株、载体第30页
     ·培养基、抗生素以及其他试剂配制第30-33页
   ·实验方法第33-51页
     ·海马齿的处理和培养第33-34页
     ·海马齿总RNA的提取第34-35页
     ·总RNA的质量鉴定第35页
     ·mRNA的纯化第35-36页
     ·初级cDNA文库的构建第36-45页
     ·转录组差异分析第45页
     ·甜菜碱脱氢酶(BADH)基因的克隆第45-49页
     ·甜菜碱脱氢酶的半定量表达分析第49-51页
3 结果与分析第51-68页
   ·海马齿全长cDNA文库的构建第51-55页
     ·海马齿总RNA的提取及质量分析第51页
     ·mRNA的纯化第51-52页
     ·cDNA第一链与cDNA第二链的合成第52-53页
     ·双链cDNA的片段分级、连接、包装及初级文库的鉴定第53-54页
     ·扩增文库的滴度测定第54-55页
   ·转录组差异分析第55-57页
     ·淡水和海水处理海马齿的总RNA的提取与分析第55页
     ·转录组差异分析-Solexa(Digital Gene Expression-Tag profiling)第55-57页
   ·BADH基因的克隆第57-64页
     ·海马齿总RNA的提取第57-58页
     ·BADH基因的克隆第58-60页
     ·目的片段的测序第60-61页
     ·序列分析第61-64页
   ·BADH基因表达量的半定量分析第64-68页
     ·海马齿总RNA的提取第64-65页
     ·内参基因Actin PCR反应平台期的确定第65-66页
     ·BADH表达量的半定量PCR及分析第66-68页
4 讨论第68-71页
   ·关于SMART法构建cDNA文库第68页
   ·关于盐生植物海马齿RNA的提取和RNA的质量第68-69页
   ·关于mRNA的纯化第69页
   ·关于cDNA文库的质量第69页
   ·关于转录组的差异分析第69页
   ·关于甜菜碱脱氢酶基因的克隆第69-70页
   ·关于甜菜碱脱氢酶基因表达量的分析第70-71页
5 结论第71-72页
参考文献第72-78页
致谢第78页

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