| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| ·茉莉酸生物合成及生理功能 | 第12页 |
| ·茉莉酸信号途径分子机制的研究进展 | 第12-16页 |
| ·SCFCOI1泛素蛋白复合体 | 第13页 |
| ·JAZ阻遏蛋白家族研究进展 | 第13-15页 |
| ·JAZ蛋白的ZIM结构域的功能 | 第14页 |
| ·JAZ蛋白的Jas结构域的功能 | 第14-15页 |
| ·MYC转录因子家族研究进展 | 第15-16页 |
| ·COI1-JAZ-MYC2是茉莉酸信号途径的核心组件 | 第16页 |
| ·SCF复合物核心成份及形成调节 | 第16-21页 |
| ·Cullin蛋白 | 第17-18页 |
| ·RBX1蛋白(Ring-box 1) | 第18-19页 |
| ·SKP的结构和功能 | 第19-20页 |
| ·Cand1对SCF组装的调节 | 第20页 |
| ·CSN对SCF组装的调节 | 第20-21页 |
| ·Nedd8/RUB对SCF组装的调节 | 第21页 |
| ·茉莉酸信号途径与天然橡胶生产 | 第21-23页 |
| ·茉莉酸调控乳管分化和天然橡胶生物合成 | 第22-23页 |
| ·乳管细胞是研究茉莉酸信号的优良模型 | 第23页 |
| ·橡胶树茉莉酸信号途径基因 | 第23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| ·本研究的技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-52页 |
| ·材料与试剂 | 第25页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·质粒及菌种 | 第25页 |
| ·生化试剂 | 第25页 |
| ·方法与步骤 | 第25-52页 |
| ·胶乳RNA的提取 | 第25-27页 |
| ·准备工作 | 第25-26页 |
| ·橡胶树胶乳总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·3'RACE扩增HbCull、HbSKP1基因的3'端 | 第27-32页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·3'RACE cDNA模板的制备 | 第27-28页 |
| ·套式PCR扩增HbCull的3'端 | 第28-29页 |
| ·套式PCR扩增HbSKP1的3'端 | 第29页 |
| ·PCR产物的回收 | 第29-30页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第30-32页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·菌液PCR检测 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组子菌种的保存 | 第32页 |
| ·5'RACE扩增HbCull的5'端 | 第32-37页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·5'RACE模板的制备 | 第32-35页 |
| ·去磷酸化处理 | 第33页 |
| ·"去帽子"反应 | 第33-34页 |
| ·5'RACE Adaptor的连接 | 第34-35页 |
| ·反转录反应 | 第35页 |
| ·套式PCR扩增HbCull 5'端 | 第35-36页 |
| ·Outer PCR反应 | 第35-36页 |
| ·Inner PCR反应 | 第36页 |
| ·PCR产物的回收 | 第36页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第36-37页 |
| ·HbCul1、HbSKP1、HbRBX1基因全长cDNA的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR产物的回收 | 第38页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第38页 |
| ·HbCul1、HbSKP1、HbRBX1的表达分析 | 第38-40页 |
| ·材料的处理 | 第38-39页 |
| ·胶乳RNA的提取 | 第39页 |
| ·cDNA的合成 | 第39页 |
| ·荧光定量PCR | 第39-40页 |
| ·HbCul1、HbSKP1、HbRBX1、HbCOI1和HbJAZ1基因的原核表达 | 第40-45页 |
| ·开放阅读框的克隆及鉴定 | 第40-41页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第41-44页 |
| ·目的片段的制备 | 第41-42页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)及pET-30a(+)的制备 | 第42-43页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第43页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第43-44页 |
| ·工程菌的表达 | 第44-45页 |
| ·E.coli BL21(DE3)感受态的制备 | 第44页 |
| ·PET28a(+)-HbCul1、PET30a(+)-HbSKP1、PET30a(+)-HbRBX1、PET30a(+)-HbCOI1、PET30a(+)-HbJAZl转化E.coli BL21(DE3) | 第44页 |
| ·工程菌的诱导表达重的融合组蛋白 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| ·HbCOI1基因转录因子的分离鉴定 | 第45-52页 |
| ·酵母单杂交诱饵载体的构建 | 第45-47页 |
| ·PHbCOIL-pHIS2.1、3PHbCOIC-pHIS2.1转化S. cerevisiae strain Y187 | 第47-48页 |
| ·pHIS2.1-PHbCOIL和pHIS2.1-3PHbCOIC在S cerevisiae strain Y187中的本底表达的检测 | 第48页 |
| ·酵母单杂交文库的构建 | 第48-50页 |
| ·橡胶树胶乳mRNA的分离与纯化 | 第48-49页 |
| ·ds cDNA的合成 | 第49-50页 |
| ·双链cDNA的纯化 | 第50页 |
| ·筛库分离鉴定HbCOI1基因转录因子 | 第50-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-68页 |
| ·胶乳RNA的提取 | 第52页 |
| ·HbCul1、HbSKP1、HbRBX1基因的克隆 | 第52-60页 |
| ·HbCul1、HbSKP1、HbRBX1基因EST片段的比对分析 | 第52-53页 |
| ·HbCul1、HbSKP1 3'端序列的扩增 | 第53页 |
| ·HbCul1 5'端序列的扩增 | 第53-54页 |
| ·HbCul1、HbSKP1、HbRBX1基因全长cDNA的克隆 | 第54页 |
| ·HbCul1、HbSKP1、HbRBX1所推导氨基酸序列的同源性分析 | 第54-60页 |
| ·HbCul1、HbSKP1、HbRBX1基因的表达分析 | 第60-62页 |
| ·割胶、机械伤害、外源茉莉酸、外源乙烯利对HbCul1表达的影响 | 第60页 |
| ·割胶、机械伤害、外源茉莉酸、外源乙烯利对HbSKP1表达的影响 | 第60-61页 |
| ·割胶、机械伤害、外源茉莉酸、外源乙烯利对HbRBX1表达的影响 | 第61页 |
| ·外源茉莉酸对HbCOI1及外源乙烯利对几丁质酶基因表达的影响 | 第61-62页 |
| ·HbCul1-His_((6))、HbSKP1-His_((6))、HbRBX1-His_((6))、HbCOI1-His_((6))、HbJAZ1-His_((6))融合蛋白的原核表达 | 第62-63页 |
| ·HbCOI1基因转录因子的分离 | 第63-68页 |
| ·酵母单杂交诱饵载体的构建 | 第63-64页 |
| ·pHIS2.1-PHBCOIL和pHIS2.1-3PHBCOIC在S.cerevisiae strain Y187中的本底表达 | 第64页 |
| ·酵母单杂交文库的构建 | 第64-65页 |
| ·酵母单杂交筛库结果 | 第65页 |
| ·HbWDR1核酸序列及推导氨基酸序列的同源性分析 | 第65-68页 |
| 4 讨论 | 第68-73页 |
| ·HbCul1、HbSKP1、HbRBXl1和HbWDR1是Cu1、SKP、RBX和WD-Repeat基因家族成员 | 第68-69页 |
| ·割胶、机械伤害、激素对HbCul1、HbSKP1、HbRBX11基因表达的影响 | 第69-70页 |
| ·关于原核表达HbCul1、HbSKP1、HbRBX1、HbCOI1、HbJAZ1和HbMYC1 | 第70-71页 |
| ·关于启动子诱饵载体的构建和文库ds cDNA的构建 | 第71页 |
| ·HbCOI1与HbWDR1的相互作用 | 第71-73页 |
| 5 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录一:有关试剂的配制 | 第81-84页 |
| 附录二:缩写词 | 第84页 |
| 附录三:HbMYC1原核表达产物的SDS-PAGE | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
