| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 縮略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-26页 |
| 1 引言 | 第13-16页 |
| ·我国畜禽养殖业污染的现状 | 第13-15页 |
| ·水源污染 | 第13-14页 |
| ·土壤污染 | 第14页 |
| ·大气污染 | 第14页 |
| ·生物污染 | 第14-15页 |
| ·畜禽养殖业污染的防控对策 | 第15-16页 |
| ·营养调控减排法 | 第15页 |
| ·生物技术法 | 第15-16页 |
| ·厌氧发酵法 | 第15-16页 |
| ·好氧堆肥法 | 第16页 |
| ·物理化学法 | 第16页 |
| 2 生物发酵床养猪技术 | 第16-20页 |
| ·生物发酵床技术研究进展 | 第16-18页 |
| ·生物发酵床的优势 | 第18-19页 |
| ·解决养猪污染,实现环保养殖 | 第18页 |
| ·提高猪的福利,改善猪肉品质 | 第18-19页 |
| ·节省饲料,提高生产性能 | 第19页 |
| ·省工节本,降低养殖成本 | 第19页 |
| ·变废为宝,改善农村环境 | 第19页 |
| ·生物发酵床存在的问题 | 第19-20页 |
| 3 微生物多样性的研究方法 | 第20-23页 |
| ·传统微生物分析方法 | 第20页 |
| ·现代微生物分析方法 | 第20-23页 |
| ·基于PCR技术的微生物分析方法 | 第20-22页 |
| ·基于生物标记的微生物分析方法 | 第22页 |
| ·基于生物碳源利用差异的微生物分析方法 | 第22页 |
| ·基于核酸杂交的微生物分析方法 | 第22-23页 |
| 4 PCR-变性梯度凝胶电泳技术 | 第23-24页 |
| ·PCR-DGGE技术的原理 | 第23-24页 |
| ·PCR-DGGE技术在研究微生物多样性中的应用 | 第24页 |
| 5 研究的目的与意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-45页 |
| 1 试验材料 | 第26-31页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·常规试剂药品、酶及试剂盒 | 第27-28页 |
| ·常用的试剂药品 | 第27页 |
| ·酶及试剂盒 | 第27-28页 |
| ·PCR反应引物 | 第28页 |
| ·常用缓冲液及试剂的配制 | 第28-30页 |
| ·主要的试验仪器设备 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-45页 |
| ·样品采集及垫料表观特征分析 | 第31页 |
| ·样品采集 | 第31页 |
| ·垫料表观特征分析 | 第31页 |
| ·芽孢杆菌的分离、筛选及鉴定 | 第31-37页 |
| ·芽孢杆菌的分离纯化 | 第31-32页 |
| ·高效芽孢杆菌的筛选 | 第32页 |
| ·淀粉酶检测 | 第32页 |
| ·蛋白酶检测 | 第32页 |
| ·高效芽孢杆菌的传统鉴定 | 第32-33页 |
| ·高效芽孢杆菌的形态观察 | 第32-33页 |
| ·高效芽孢杆菌的生理生化鉴定 | 第33页 |
| ·高效芽孢杆菌的16S rRNA分子生物学鉴定 | 第33-37页 |
| ·高效芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·提取基因组DNA的浓度测定和质量检测 | 第34页 |
| ·16S rRNA基因PCR扩增和检测 | 第34页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第34-35页 |
| ·纯化PCR产物与载体连接 | 第35页 |
| ·感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第35-36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·阳性克隆子的鉴定和测序 | 第36-37页 |
| ·PCR-DGGE | 第37-45页 |
| ·微生物总基因组DNA的提取、纯化 | 第37-38页 |
| ·生物发酵床垫料样品的前处理 | 第37页 |
| ·微生物总基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·微生物总基因组DNA的纯化 | 第38页 |
| ·微生物总基因组DNA浓度测定和质量检测 | 第38页 |
| ·16S rRNA基因V6～V8区PCR扩增和检测 | 第38-39页 |
| ·PCR-DGGE | 第39-42页 |
| ·垂直梯度凝胶制备 | 第39-41页 |
| ·平行梯度凝胶制备 | 第41-42页 |
| ·DGGE电泳 | 第42页 |
| ·染色及拍照 | 第42页 |
| ·Quantity One软件分析DGGE图谱 | 第42-43页 |
| ·条带回收、克隆、测序 | 第43-45页 |
| ·目的片段的回收 | 第43页 |
| ·回收目的片段的PCR扩增和检测 | 第43页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第43页 |
| ·纯化PCR产物与载体连接 | 第43页 |
| ·感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第43页 |
| ·连接产物的转化 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆子的鉴定和测序 | 第44页 |
| ·Blast比对分析 | 第44-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-62页 |
| 1 样品采集及垫料表观特征分析 | 第45-46页 |
| ·样品采集 | 第45页 |
| ·垫料表观特征分析 | 第45-46页 |
| 2 芽孢杆菌的分离、筛选及鉴定 | 第46-50页 |
| ·芽孢杆菌的分离纯化 | 第46页 |
| ·高效芽孢杆菌的筛选 | 第46-47页 |
| ·淀粉酶检测 | 第46页 |
| ·蛋白酶检测 | 第46-47页 |
| ·高效芽孢杆菌的传统鉴定 | 第47-48页 |
| ·高效芽孢杆菌的形态观察 | 第47-48页 |
| ·高效芽孢杆菌的生理生化鉴定 | 第48页 |
| ·高效芽孢杆菌的16S rRNA分子生物学鉴定 | 第48-50页 |
| ·高效芽孢杆菌基因组DNA | 第48-49页 |
| ·16S rRNA基因PCR扩增 | 第49页 |
| ·PCR产物克隆鉴定 | 第49-50页 |
| 3 PCR-DGGE | 第50-62页 |
| ·微生物总基因组DNA | 第50页 |
| ·16S rRNA基因V6～V8区PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·PCR-DGGE | 第51-53页 |
| ·垂直DGGE | 第51页 |
| ·平行DGGE | 第51-53页 |
| ·Quantity One软件分析DGGE图谱 | 第53-57页 |
| ·条带回收、克隆、测序 | 第57-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-66页 |
| 1 芽孢杆菌的分离和鉴定 | 第62页 |
| 2 芽孢杆菌功能探讨 | 第62-63页 |
| 3 生物发酵床垫料中微生物总基因组DNA的提取 | 第63-64页 |
| 4 PCR-DGGE技术研究微生物的16S rRNA | 第64页 |
| 5 猪用生物发酵床垫料中微生物群落多样性变化 | 第64-66页 |
| 第五章 小结 | 第66-68页 |
| 1 本研究所取得的成果 | 第66-67页 |
| ·高效芽孢杆菌的筛选与鉴定 | 第66页 |
| ·DGGE分子生物学分析 | 第66-67页 |
| 2 下一步值得研究的工作 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 致谢 | 第77页 |