基于GFP标记的镉生物传感器构建及其对镉毒性的检测
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-15页 |
| 1 微生物抗重金属的机制 | 第8-10页 |
| ·生物吸附 | 第8-9页 |
| ·代谢累积 | 第9-10页 |
| ·微生物对重金属的氧化还原 | 第9-10页 |
| ·输出系统对重金属的作用 | 第10页 |
| ·形成金属硫化物或磷酸盐 | 第10页 |
| 2 镉生物传感器研究现状 | 第10-11页 |
| 3 新型报告基因GFP特点 | 第11-12页 |
| 4 GFP蛋白在环境微生物研究中的应用 | 第12-14页 |
| ·生物膜和活性污泥 | 第12-13页 |
| ·微生物降解及其迁移 | 第13页 |
| ·作为标记基因研究代谢过程 | 第13-14页 |
| 5 本研究的目的 | 第14-15页 |
| 材料与方法 | 第15-26页 |
| 1 实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·试剂盒和酶 | 第17页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| 2 实验方法 | 第17-26页 |
| ·菌体培养 | 第17-18页 |
| ·最低抑菌浓度检测 | 第18页 |
| ·构建镉响应荧光表达单元 | 第18-22页 |
| ·EGFP基因的克隆 | 第18-20页 |
| ·镉响应启动子CadR的克隆 | 第20-22页 |
| ·诱导验证 | 第22页 |
| ·镉生物毒性的检测 | 第22页 |
| ·细胞发光量与环境中镉浓度的关系 | 第22页 |
| ·土壤中固体颗粒对细胞发光量的影响 | 第22页 |
| ·荧光工程菌X4(pHQ311)的构建 | 第22-23页 |
| ·pX4质粒的测序及分析 | 第22-23页 |
| ·荧光标记野生质粒pX4 | 第23页 |
| ·将标记过的质粒导入X4 | 第23页 |
| ·荧光工程菌NTG01(pHQX1)的构建 | 第23-24页 |
| ·生物传感器盆栽试验 | 第24-26页 |
| ·烟草种子的前处理及苗期管理 | 第24页 |
| ·培养用土及处理 | 第24页 |
| ·细胞的处理及接种 | 第24-25页 |
| ·荧光显微镜观察细菌发光 | 第25-26页 |
| 结果与讨论 | 第26-52页 |
| 1 两株抗重金属细菌的性质 | 第26页 |
| 2 特异性镉响应荧光表达单元 | 第26-34页 |
| ·克隆绿色荧光蛋白 | 第26-30页 |
| ·镉响应调控基因Cad R的克隆 | 第30-34页 |
| 3 镉生物毒性的检测 | 第34-43页 |
| ·镉响应的生物模型 | 第34-42页 |
| ·数学模型结论 | 第42-43页 |
| 4 土壤固体颗粒对细胞发光量的影响 | 第43-44页 |
| 5 荧光工程菌X4构建 | 第44-47页 |
| ·X4菌株野生质粒分析 | 第44-46页 |
| ·X4工程菌的构建 | 第46-47页 |
| 6 工程菌NTG01的构建 | 第47-50页 |
| 7 生物传感器盆栽试验 | 第50-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
