| 摘要:人线粒体亮氨酸tRNA 结构和功能的研究/超嗜热菌亮氨酰-tRNA 合成酶双亚基的体外重组 | 第1-5页 |
| ABSTRACT :Study on the structure and function of human mitochondrial tRNA~(Leu) / In Vitro recombination of the two subunits of Leucyl-tRNA synthetase from Aquifex aeolicus | 第5-13页 |
| 第一部分 人线粒体亮氨酸tRNA 的结构、功能以及与疾病的关系 | 第13-82页 |
| 第一章 某些 MELAS 症相关的点突变导致人线粒体tRNA~(Leu)(UUR)的氨基酰化降低 | 第13-40页 |
| 摘要 | 第13页 |
| 关键词 | 第13-14页 |
| 1. 引言 | 第14-18页 |
| 2. 材料和方法 | 第18-24页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·野生型hmtRNAsLeu(UUR)及其突变体T7 体外转录 | 第19-22页 |
| ·tRNA 转录子接受茎活力的测定 | 第22-23页 |
| ·突变体对野生型tRNA 氨基酰化影响的测定 | 第23页 |
| ·各种hmtRNA~(Leu)(UUR)突变体熔点(Tm 值)的测定 | 第23-24页 |
| 3. 结果 | 第24-31页 |
| ·hmtRNA~(Leu)(UUR)变种的构建和转录 | 第24-25页 |
| ·MELAS症相关突变导致hmtRNA~(Leu)(UUR)亮氨酰化活力降低 | 第25-28页 |
| ·两种hmtRNALeu(UUR)突变体融点(Tm 值)明显下降 | 第28-29页 |
| ·T3291C 突变体能够抑制野生型的亮氨酰化反应 | 第29-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-34页 |
| 参考文献 | 第34-40页 |
| 第二章 人类线粒体tRNA~(Leu)(CUN) 中存在一种特殊的T-茎滑动现象 | 第40-82页 |
| 摘要 | 第40-41页 |
| 关键词 | 第41页 |
| 1. 引言 | 第41-46页 |
| 2. 材料和方法 | 第46-54页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·tRNA 转录产物的制备 | 第47-49页 |
| ·tRNA 转录子接受茎活力的测定 | 第49-50页 |
| ·tRNA 二级结构的预测 | 第50页 |
| ·核酸酶水解法探测tRNA的结构 | 第50-52页 |
| ·tRNA 结合蛋白亲和层析柱的制备 | 第52-53页 |
| ·培养细胞线粒体的分离和纯化 | 第53-54页 |
| ·亲和层析分离tRNA结合蛋白 | 第54页 |
| 3. 结果 | 第54-70页 |
| ·疾病相关的T12311C(U48C)突变导致tRNA~(Leu)(CUN)的氨基酰化活力上升 | 第54-56页 |
| ·分析hmtRNA~(Leu)(CUN)的结构 | 第56-61页 |
| ·人为控制hmtRNA~(Leu)(CUN) 的T-茎滑动现象 | 第61-66页 |
| ·T-茎滑动对hmtRNA~(Leu)(CUN)氨基酰化的影响 | 第66-68页 |
| ·T-茎滑动影响tRNA 与某些配体分子的结合 | 第68-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 第二部分 超嗜热菌亮氨酰-tRNA 合成酶双亚基的体外重组 | 第82-100页 |
| 第三章 超嗜热菌Aquifex aeolicus亮氨酰-tRNA合成酶双亚基体外重组的研究 | 第82-100页 |
| 摘要 | 第82页 |
| 关键词 | 第82-83页 |
| 1. 引言 | 第83-85页 |
| 2. 材料和方法 | 第85-91页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·质粒pET-28a(+)-lrsa 的构建 | 第86-87页 |
| ·His_6-α的表达 | 第87-88页 |
| ·融合蛋白His_6-α的纯化 | 第88页 |
| ·圆二色性(CD)光谱的测定 | 第88-89页 |
| ·His_6-α对tRΝΑ的凝胶阻滞实验 | 第89-90页 |
| ·体外转录tRNA 的末端标记 | 第89页 |
| ·α亚基对tRNA 的凝胶阻滞实验 | 第89-90页 |
| ·双亚基体外重组条件的筛选和优化 | 第90页 |
| ·重组酶氨酰化比活力的测定 | 第90-91页 |
| ·重组酶氨基酰化反应的最适温度测定 | 第91页 |
| 3. 结果 | 第91-98页 |
| ·质粒pET-28a(+)-lrsa 的构建 | 第91页 |
| ·lrsa 基因的表达和融合蛋白His_6-α的纯化 | 第91-92页 |
| ·α亚基CD 光谱的测定结果 | 第92-93页 |
| ·单独的α亚基不能结合tRNA~(Leu) | 第93-94页 |
| ·体外重组条件的筛选和优化 | 第94-96页 |
| ·体外重组酶催化氨酰化反应的温度曲线 | 第96-98页 |
| 4. 讨论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-100页 |
| 结论 | 第100-102页 |
| 附录:本论文缩写汇编 | 第102-105页 |
| 在学期间论文发表、会议报告、和获奖目录 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
