脂肪酶构象的刻录及荧光光谱分析
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-30页 |
| ·脂肪酶简介 | 第11-13页 |
| ·脂肪酶的活性中心 | 第11-12页 |
| ·脂肪酶的“盖子”结构 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶的修饰 | 第13-17页 |
| ·脂肪酶的固定化 | 第13-15页 |
| ·脂肪酶固定化的优缺点 | 第13-14页 |
| ·固定化酶的制备方法 | 第14-15页 |
| ·生物印迹 | 第15-17页 |
| ·生物印迹的过程和原理 | 第16页 |
| ·脂肪酶生物印迹配体的选择 | 第16-17页 |
| ·脂肪酶生物印迹存在的问题 | 第17页 |
| ·分子印迹 | 第17-19页 |
| ·功能单体和交联剂的选择 | 第18页 |
| ·蛋白质分子印迹的印迹方式 | 第18-19页 |
| ·酶的活性与构象的关系 | 第19-23页 |
| ·蛋白质的空间构象 | 第20-21页 |
| ·蛋白质变性机理 | 第21-22页 |
| ·酶活性部位的构象变化先于整体构象变化之前 | 第22-23页 |
| ·蛋白质构象研究方法 | 第23-29页 |
| ·X射线衍射 | 第23页 |
| ·旋光色散和圆二色谱 | 第23-24页 |
| ·傅立叶红外变换光谱 | 第24-25页 |
| ·荧光光谱 | 第25-29页 |
| ·激发光谱和发射光谱 | 第25-26页 |
| ·荧光强度和能量转移 | 第26-27页 |
| ·蛋白质内源荧光 | 第27-28页 |
| ·外源荧光FITC(异硫氰基荧光素) | 第28-29页 |
| ·本文研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 脂肪酶构象的刻录及水相催化 | 第30-39页 |
| ·材料与设备 | 第30-31页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·主要实验设备 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-34页 |
| ·实验步骤 | 第31-33页 |
| ·脂肪酶及配制 | 第31页 |
| ·脂肪酶构象的刻录 | 第31-32页 |
| ·水相中刻录脂肪酶的催化时间 | 第32页 |
| ·水相刻录酶催化活性 | 第32页 |
| ·pH值对刻录酶水相催化活性的影响 | 第32页 |
| ·温度对刻录酶水相催化活性的影响 | 第32-33页 |
| ·分析方法 | 第33-34页 |
| ·游离脂肪酶活性的测定 | 第33页 |
| ·刻录酶活性测定 | 第33-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-38页 |
| ·刻录酶在水相中的催化反应时间 | 第34页 |
| ·各种刻录酶聚合物的活性比较 | 第34-36页 |
| ·pH值对刻录酶水相催化活性的影响 | 第36-37页 |
| ·温度对刻录酶水相催化活性的影响 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第三章 诱导刻录酶和未诱导刻录酶的比较 | 第39-46页 |
| ·材料与设备 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·主要实验设备 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·实验步骤 | 第39-40页 |
| ·底物诱导刻录酶的制备 | 第39页 |
| ·石油醚和丙酮作为抽提溶剂的比较 | 第39-40页 |
| ·有无底物诱导刻录酶活比较 | 第40页 |
| ·有无底物诱导刻录酶在不同条件下比较 | 第40页 |
| ·分析方法 | 第40-42页 |
| ·游离月桂酸浓度测定-铜皂比色法 | 第40-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-45页 |
| ·石油醚与丙酮抽提效果对比 | 第42页 |
| ·诱导刻录酶与未诱导刻录酶的活性比较 | 第42-43页 |
| ·温度对诱导刻录酶与未诱导刻录酶的影响比较 | 第43-44页 |
| ·pH值对诱导刻录酶与未诱导刻录酶的影响比较 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第四章 荧光光谱考察酶构象 | 第46-59页 |
| ·材料与设备 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·主要实验设备 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-50页 |
| ·实验步骤 | 第46-50页 |
| ·聚丙烯酰胺电泳测定酶纯度以及分子量 | 第46-47页 |
| ·蛋白质的荧光标记 | 第47页 |
| ·荧光标记对酶活性的影响 | 第47-48页 |
| ·荧光酶的刻录 | 第48页 |
| ·空白载体的荧光测定 | 第48-49页 |
| ·变性剂对脂肪酶液和荧光刻录酶的影响 | 第49页 |
| ·pH对脂肪酶液和荧光刻录酶的影响 | 第49页 |
| ·温度对脂肪酶液和荧光刻录酶的影响 | 第49-50页 |
| ·分析方法 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-58页 |
| ·温度的影响 | 第50-53页 |
| ·变性剂对脂肪酶液和荧光刻录酶的影响 | 第53-56页 |
| ·pH值的影响 | 第56-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第五章 结论和建议 | 第59-61页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| ·建议 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 发表论文 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |