| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1 银耳概述 | 第12-14页 |
| ·银耳的研究历史 | 第12-13页 |
| ·银耳的形态特征 | 第13页 |
| ·银耳的生活史 | 第13-14页 |
| ·银耳的营养和药用价值 | 第14页 |
| ·银耳生物反应器的相关研究 | 第14页 |
| 2. 胰岛素概述 | 第14-17页 |
| ·胰岛素的研究历史 | 第14-15页 |
| ·胰岛素的生物活性和结构 | 第15页 |
| ·胰岛素的提取 | 第15-16页 |
| ·重组胰岛素的研究进展 | 第16-17页 |
| 3 实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）概述 | 第17-19页 |
| ·qRT-PCR 的基本原理 | 第17页 |
| ·qRT-PCR 的定量方法 | 第17-18页 |
| ·绝对定量 | 第17-18页 |
| ·相对定量 | 第18页 |
| ·qRT-PCR 在转基因检测中的应用 | 第18-19页 |
| 4 转基因表达产物检测方法概述 | 第19-20页 |
| ·酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA 法） | 第19页 |
| ·蛋白免疫印记杂交（Western blot） | 第19-20页 |
| ·其他方法 | 第20页 |
| 5 本课题的研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 qRT-PCR 检测转基因银耳中人胰岛素 BCA 基因的拷贝数 | 第22-44页 |
| 1 材料和方法 | 第22-33页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第22页 |
| ·培养基配制 | 第22页 |
| ·引物 | 第22-23页 |
| ·CTAB 法提取 DNA 药品配制 | 第23-24页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-33页 |
| ·试验菌株的分子鉴定 | 第24-26页 |
| ·qRT-PCR 绝对定量 | 第26-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-43页 |
| ·试验菌株的分子鉴定 | 第33-35页 |
| ·ITS 序列分析 | 第33-34页 |
| ·潮霉素抗性基因（hph）检测 | 第34-35页 |
| ·人胰岛素基因（BCA）检测 | 第35页 |
| ·qRT-PCR 绝对定量法检测转基因银耳中 BCA 基因拷贝数 | 第35-43页 |
| ·5 个转化子菌株基因组 DNA 的电泳检测 | 第35-36页 |
| ·内参基因 GPD 和外源目的基因 BCA 标准曲线的建立 | 第36-39页 |
| ·实时荧光定量 PCR 体系的精确度分析 | 第39页 |
| ·5 个银耳转化子菌株外源目的基因 BCA 拷贝数的检测结果 | 第39-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 人胰岛素 BCA 基因在银耳子实体中的表达分析 | 第44-55页 |
| 1 材料和方法 | 第44-48页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·实验菌株 | 第44页 |
| ·培养基配制 | 第44页 |
| ·PCR 引物 | 第44页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-48页 |
| ·银耳转化子菌株 T26 与单孢菌株的活化培养 | 第45页 |
| ·银耳转化子菌株 T26 与单孢菌株配对接种 | 第45页 |
| ·子实体基因组 DNA 提取及 PCR 检测 | 第45-46页 |
| ·子实体总 RNA 提取及 RT-PCR 检测 | 第46-47页 |
| ·子实体中人胰岛素 BCA 基因表达产物的检测 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-53页 |
| ·银耳转基因菌株 T26 与单孢菌株配对出耳结果 | 第48页 |
| ·子实体 DNA 水平 hph 基因和 BCA 基因检测 | 第48-51页 |
| ·ITS 序列分析 | 第48-49页 |
| ·潮霉素抗性基因（hph）检测 | 第49-50页 |
| ·人胰岛素基因（BCA）检测 | 第50-51页 |
| ·子实体总 RNA 提取及 RT-PCR 检测 | 第51-52页 |
| ·各样品总 RNA 电泳检测结果 | 第51-52页 |
| ·各样品 RT-PCR 检测结果 | 第52页 |
| ·子实体中人胰岛素 BCA 基因表达产物的检测 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 人胰岛素 BCA 基因在银耳芽孢中的表达分析 | 第55-73页 |
| 1 材料和方法 | 第55-60页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·实验菌株 | 第55页 |
| ·培养基配制 | 第55页 |
| ·qRT-PCR 引物 | 第55页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| ·银耳转化子菌株潮霉素抗性分析 | 第56页 |
| ·银耳转化子菌株的培养和收集 | 第56页 |
| ·qRT-PCR 相对定量 | 第56-59页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第59-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-71页 |
| ·银耳转化子潮霉素抗性分析 | 第60-61页 |
| ·qRT-PCR 相对定量法检测转基因银耳中 BCA 在 mRNA 水平的表达量 | 第61-70页 |
| ·5 个转化子菌株的总 RNA 电泳检测结果 | 第61-62页 |
| ·内参基因 GPD 和外源目的基因 BCA 扩增效率的检测 | 第62-65页 |
| ·5 个银耳转化子菌株外源目的基因 BCA 在 mRNA 水平的检测结果 | 第65-70页 |
| ·银耳转基因菌株表达产物的 ELISA 检测与高表达菌株筛选 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 转人胰岛素基因银耳的发酵条件优化 | 第73-86页 |
| 1 材料和方法 | 第73-75页 |
| ·材料 | 第73-74页 |
| ·实验菌株 | 第73页 |
| ·培养基配制 | 第73页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第73-74页 |
| ·方法 | 第74-75页 |
| ·T65 菌株的活化和培养 | 第74页 |
| ·不同碳源培养基的配制 | 第74页 |
| ·不同氮源培养基的配制 | 第74页 |
| ·不同 pH 条件培养基的配制 | 第74页 |
| ·发酵培养液 OD 值的测定及菌体收集 | 第74-75页 |
| ·实验数据分析 | 第75页 |
| ·菌体中人胰岛素 BCA 基因表达产物的检测 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-85页 |
| ·银耳转化子菌株发酵碳源筛选 | 第75-78页 |
| ·OD 值测定结果 | 第75-76页 |
| ·菌体湿重测定结果 | 第76-77页 |
| ·ELISA 检测 | 第77-78页 |
| ·银耳转化子菌株发酵氮源筛选 | 第78-81页 |
| ·OD 值测定结果 | 第78-80页 |
| ·菌体湿重测定结果 | 第80页 |
| ·ELISA 检测 | 第80-81页 |
| ·银耳转化子菌株发酵的最适 pH | 第81-85页 |
| ·OD 值测定结果 | 第81-83页 |
| ·菌体湿重测定结果 | 第83-84页 |
| ·ELISA 检测 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-86页 |
| 总结 | 第86-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
