| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| ·生物催化 | 第14-18页 |
| ·生物催化技术的核心--生物催化剂 | 第14-16页 |
| ·生物催化反应的类型 | 第16-17页 |
| ·生物催化的发展策略与前景 | 第17-18页 |
| ·环氧化物水解酶 | 第18-22页 |
| ·环氧化物水解酶的作用机制 | 第19-20页 |
| ·各种来源的环氧化物水解酶 | 第20-22页 |
| ·哺乳动物环氧化物水解酶 | 第20-21页 |
| ·植物的环氧化物水解酶 | 第21页 |
| ·微生物中的环氧化物水解酶 | 第21-22页 |
| ·手性化合物研究进展 | 第22-24页 |
| ·酒石酸的研究概况 | 第24-28页 |
| ·L(+)-酒石酸的研究概况 | 第24-26页 |
| ·D(-)-酒石酸的研究概况 | 第26-28页 |
| ·本研究的目的及内容 | 第28-29页 |
| 第二章 产D(-)-酒石酸菌株的分离及鉴定 | 第29-39页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·菌株的分离源 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-32页 |
| ·富集 | 第30页 |
| ·菌株的分离纯化 | 第30页 |
| ·酶活的测定 | 第30-31页 |
| ·菌株1-3的鉴定 | 第31-32页 |
| ·细菌的形态观察 | 第31页 |
| ·生理生化鉴定 | 第31页 |
| ·DNA G+C含量测定 | 第31-32页 |
| ·16S rDNA序列测定 | 第32页 |
| ·基于16S rDNA序列的系统发育分析 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-38页 |
| ·产D(-)-酒石酸菌株的筛选 | 第32-33页 |
| ·菌株1-3的鉴定 | 第33-38页 |
| ·形态学研究 | 第33页 |
| ·菌株1-3的生理生化特性 | 第33-36页 |
| ·菌株1-3的DNA G+C含量测定 | 第36页 |
| ·菌株1-3的16S rDNA序列测定及系统发育分析 | 第36-38页 |
| ·结论 | 第38-39页 |
| 第三章 固定化细胞生产D(-)-酒石酸的研究 | 第39-45页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·试剂及培养基 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-41页 |
| ·细胞固定化及生物转化 | 第40页 |
| ·转化产物的纯化 | 第40页 |
| ·纯化产物的鉴定 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-44页 |
| ·细胞固定化及生物转化 | 第41-42页 |
| ·转化产物的鉴定 | 第42-44页 |
| ·结论 | 第44-45页 |
| 第四章 菌株1-3产酶发酵条件的研究 | 第45-63页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·试剂及培养基 | 第46页 |
| ·培养条件 | 第46页 |
| ·单因素实验方法产酶发酵条件的研究 | 第46-48页 |
| ·不同氮源对菌株1-3产酶的影响 | 第46页 |
| ·不同碳源对菌株1-3产酶的影响 | 第46-47页 |
| ·单因素实验方法对所选氮源最佳浓度的确定 | 第47页 |
| ·不同诱导物对菌株1-3产酶的影响 | 第47页 |
| ·单因素实验方法对碳源及诱导物最佳浓度的确定 | 第47页 |
| ·单因素的实验方法确定培养基的最佳起始pH | 第47页 |
| ·10升发酵罐发酵菌株1-3的研究 | 第47-48页 |
| ·响应面的方法确定菌株1-3的产酶发酵条件 | 第48-49页 |
| ·Plackett-Burman设计优化菌株1-3培养基及培养条件 | 第48页 |
| ·最陡坡的实验设计 | 第48页 |
| ·中心组合旋转设计 | 第48-49页 |
| ·验证实验 | 第49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-62页 |
| ·不同氮源对菌株1-3产酶的影响 | 第49-50页 |
| ·不同碳源对菌株1-3产酶的影响 | 第50-52页 |
| ·碳源浓度对菌株1-3产酶的影响 | 第52页 |
| ·不同诱导物对菌株1-3产酶的影响 | 第52-53页 |
| ·不同的起始pH对菌株1-3产酶的影响 | 第53-54页 |
| ·10升发酵罐对菌株1-3发酵产酶的研究结果 | 第54-55页 |
| ·Plackett-Burman设计的实验结果 | 第55-57页 |
| ·最陡坡试验设计的结果 | 第57页 |
| ·中心组合旋转设计和响应面分析 | 第57-61页 |
| ·最佳培养条件的验证实验 | 第61-62页 |
| ·结论 | 第62-63页 |
| 第五章 酶的纯化及其性质研究 | 第63-77页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·材料及试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-67页 |
| ·主要方法 | 第63-64页 |
| ·纯化步骤 | 第64-65页 |
| ·粗酶液的制备 | 第64页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第64页 |
| ·离子交换层析 | 第64-65页 |
| ·疏水层析 | 第65页 |
| ·分子筛层析 | 第65页 |
| ·酶性质的研究 | 第65-67页 |
| ·酶的纯度及分子量的测定 | 第65-66页 |
| ·酶的最适反应温度及其热稳定性 | 第66页 |
| ·酶的最适反应pH及其pH稳定性 | 第66页 |
| ·各种金属离子及化学试剂对酶活的影响 | 第66页 |
| ·酶促反应动力学研究 | 第66页 |
| ·酶的N端氨基酸序列和酶活性中心的离子 | 第66-67页 |
| ·结果及分析 | 第67-76页 |
| ·顺式环氧琥珀酸水解酶的纯化结果 | 第67-71页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第67页 |
| ·DEAE-Cellulose离子交换层析 | 第67页 |
| ·Toyopearl HW-65C疏水层析 | 第67-68页 |
| ·Sephadex G-75分子筛层析 | 第68-69页 |
| ·顺式环氧琥珀酸水解酶的提纯结果 | 第69-71页 |
| ·顺式环氧琥珀酸水解酶的性质 | 第71-76页 |
| ·顺式环氧琥珀酸水解酶的分子量 | 第71页 |
| ·酶的最适作用温度与热稳定性 | 第71-72页 |
| ·酶的最适反应pH与pH稳定性 | 第72-73页 |
| ·各种金属离子及化学试剂对酶活的影响 | 第73-75页 |
| ·酶促反应动力学研究 | 第75页 |
| ·N端氨基酸序列的测定 | 第75-76页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| 第六章 顺式环氧琥珀酸水解酶基因的克隆与表达 | 第77-92页 |
| ·材料 | 第77-79页 |
| ·菌种和载体 | 第77页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第77-78页 |
| ·其它试剂 | 第78页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第78-79页 |
| ·常用仪器 | 第79页 |
| ·一般方法 | 第79-82页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第79页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第79-80页 |
| ·小批量快速抽提质粒DNA | 第80页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第80-81页 |
| ·目的基因片断的胶回收 | 第81页 |
| ·连接反应 | 第81页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第81-82页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第82页 |
| ·具体方法 | 第82-85页 |
| ·DNA的提取 | 第82-83页 |
| ·PCR扩增 | 第83页 |
| ·限制性内切酶双酶切及纯化 | 第83-84页 |
| ·连接及转化 | 第84页 |
| ·转化子的挑选及鉴定 | 第84-85页 |
| ·BL21的转化及诱导表达 | 第85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-91页 |
| ·菌株1-3基因组的提取及PCR扩增 | 第85-89页 |
| ·重组质粒的构建 | 第89页 |
| ·DH5α的转化与重组载体的鉴定 | 第89-90页 |
| ·E.coli.BL21感受态细胞的转化及诱导表达 | 第90-91页 |
| ·结论 | 第91-92页 |
| 第七章 重组顺式环氧琥珀酸水解酶的纯化及性质的研究 | 第92-99页 |
| ·材料 | 第92-93页 |
| ·材料及试剂 | 第92页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第92-93页 |
| ·主要仪器 | 第93页 |
| ·方法 | 第93-94页 |
| ·菌体的大量培养 | 第93页 |
| ·重组酶的纯化 | 第93-94页 |
| ·重组蛋白的酶性质研究 | 第94页 |
| ·重组蛋白分子量的确定 | 第94页 |
| ·最适pH及pH稳定性 | 第94页 |
| ·最适反应温度及热稳定性 | 第94页 |
| ·结果与分析 | 第94-98页 |
| ·重组酶的纯化 | 第94-95页 |
| ·重组酶的最适反应pH及pH稳定性 | 第95-97页 |
| ·重组酶的最适反应温度及热稳定性 | 第97-98页 |
| ·结论 | 第98-99页 |
| 第八章 结论与展望 | 第99-102页 |
| ·主要结论 | 第99-100页 |
| ·论文创新点 | 第100页 |
| ·展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 作者简介 | 第111-112页 |
