| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·蛋白质折叠研究的意义 | 第11-13页 |
| ·肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase) | 第13-16页 |
| ·脯氨酸在蛋白质结构中的特殊性 | 第14-15页 |
| ·脯氨酸假说 | 第15页 |
| ·肽酰脯氨酰顺反异构酶的发现 | 第15-16页 |
| ·肽酰脯氨酰顺反异构酶的催化作用 | 第16页 |
| ·亲环蛋白家族 | 第16-18页 |
| ·亲环蛋白A(CypA) | 第18-20页 |
| ·蛋白质折叠的研究方法 | 第20-21页 |
| ·蛋白质构象的研究方法 | 第20页 |
| ·蛋白质折叠早期现象的检测 | 第20-21页 |
| ·重折叠底物(RNase A和G-CSF) | 第21-23页 |
| ·核糖核酸酶A(RNase A) | 第21-22页 |
| ·粒细胞集落刺激因子(G-CSF) | 第22-23页 |
| ·本文研究思路和内容 | 第23-25页 |
| 第二章 重组CypA的表达 | 第25-35页 |
| ·实验材料和仪器 | 第25-27页 |
| ·质粒和菌株 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·实验仪器 | 第26-27页 |
| ·分析方法 | 第27页 |
| ·细胞生长测定 | 第27页 |
| ·CypA表达量测定 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-28页 |
| ·质粒转化与菌种筛选 | 第27页 |
| ·菌种保藏 | 第27-28页 |
| ·实验结果与讨论 | 第28-34页 |
| ·菌种筛选 | 第28-29页 |
| ·重组E.coli细胞生长曲线测定 | 第29-30页 |
| ·质粒转化成功的检测 | 第30页 |
| ·胞内胞外产物的检测 | 第30-31页 |
| ·温度对CypA表达的影响 | 第31-33页 |
| ·摇床转速对CypA表达的影响 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 重组CypA的发酵与纯化 | 第35-48页 |
| ·实验材料与仪器 | 第35-36页 |
| ·菌株 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·缓冲液与试剂 | 第35-36页 |
| ·离子交换树脂 | 第36页 |
| ·实验仪器 | 第36页 |
| ·分析方法 | 第36-37页 |
| ·重组CypA表达量的测定 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE分析纯化结果 | 第36页 |
| ·考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·重组CypA表达过程优化 | 第37页 |
| ·细胞收集与破碎 | 第37-38页 |
| ·离子交换层析 | 第38页 |
| ·实验结果与讨论 | 第38-46页 |
| ·培养基对CypA表达的影响 | 第38-40页 |
| ·Amp浓度对CypA表达的影响 | 第40-41页 |
| ·接种量对CypA表达的影响 | 第41-42页 |
| ·装液量对CypA表达的影响 | 第42页 |
| ·诱导条件对CypA表达的影响 | 第42-45页 |
| ·优化后的目标蛋白表达量 | 第45页 |
| ·离子交换层析纯化CypA | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 第四章 CypA Pro16/Ser16突变株的表征 | 第48-67页 |
| ·实验材料和仪器 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·质粒DNA测序 | 第48-49页 |
| ·肤质量指纹图谱测定 | 第49页 |
| ·PPIase活性测定 | 第49-50页 |
| ·CsA抑制作用测定 | 第50-51页 |
| ·CypA变性曲线测定 | 第51页 |
| ·CypA重折叠研究 | 第51页 |
| ·实验结果与讨论 | 第51-66页 |
| ·质粒DNA序列测定 | 第51页 |
| ·肤质量指纹图谱测定 | 第51-52页 |
| ·PPIase活力测定 | 第52-59页 |
| ·CsA对CypA的抑制作用测定 | 第59-62页 |
| ·CypA变性曲线测定 | 第62-63页 |
| ·CypA体外自催化折叠研究 | 第63-65页 |
| ·Pro16/Ser16取代对CypA结构功能的作用 | 第65-66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 CypA协助蛋白质体外重折叠研究 | 第67-77页 |
| ·实验材料与仪器 | 第67-68页 |
| ·实验材料 | 第67页 |
| ·实验仪器 | 第67-68页 |
| ·分析方法 | 第68-69页 |
| ·DTNB法(Ellman's法)测自由疏基的含量 | 第68-69页 |
| ·RP-HPLC法动态分析G-CSF折叠过程 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-70页 |
| ·RNase A体外重折叠 | 第69页 |
| ·G-CSF体外重折叠 | 第69-70页 |
| ·实验结果与讨论 | 第70-75页 |
| ·CypA协助RNase A体外重折叠 | 第70-71页 |
| ·CypA协助G-CSF体外重折叠 | 第71-75页 |
| ·本章小结 | 第75-77页 |
| 第六章 结论与建议 | 第77-79页 |
| ·结论 | 第77-78页 |
| ·建议 | 第78-79页 |
| 符号说明 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第86页 |
