| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| ·我国发展燃料乙醇工业的现状 | 第10-11页 |
| ·燃料乙醇生产的酿酒酵母菌种选育技术 | 第11-13页 |
| ·基因敲除技术改变代谢途径 提高酵母发酵乙醇的产量 | 第13-16页 |
| ·研究内容 | 第16-18页 |
| 第2章 GDH1缺失型酿酒酵母的构建 | 第18-46页 |
| ·前言 | 第18页 |
| ·实验材料 | 第18-22页 |
| ·菌种及质粒 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第19-22页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·配制溶液 | 第20-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-32页 |
| ·Cre-LoxP系统的酿酒酵母基因敲除法的原理 | 第22-23页 |
| ·酵母基因组DNA提取(振荡涡旋法) | 第23页 |
| ·质粒pUG6和pSH65的准备 | 第23-25页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·CaCl_2法转化质粒pUG6和pSH65 | 第24页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第24页 |
| ·质粒的DNA提取(碱法小提) | 第24-25页 |
| ·酶切验证 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25-27页 |
| ·验证引物 | 第25-26页 |
| ·敲除组件的引物R1、R2 | 第26-27页 |
| ·GDH1基因敲除组件R1-R2的构建 | 第27-28页 |
| ·PCR获得敲除组件R1-R2 | 第27页 |
| ·TA克隆 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定及测序 | 第28页 |
| ·乙醇沉淀扩增产物R1-R2 | 第28页 |
| ·敲除GDH1基因第一步 | 第28-32页 |
| ·转化敲除组件R1-R2 | 第28-30页 |
| ·影印平板法筛选转化子 | 第30页 |
| ·PCR验证转化子 | 第30-31页 |
| ·转化质粒pSH65 | 第31页 |
| ·Kan筛选标记切除 | 第31-32页 |
| ·PCR验证Kan~r抗性标记切除的菌株 | 第32页 |
| ·传代丢失质粒pSH65 | 第32页 |
| ·敲除GDH1基因第二步 | 第32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-44页 |
| ·酵母基因组DNA提取 | 第32-34页 |
| ·质粒pUG6和pSH65的准备 | 第34-35页 |
| ·引物设计 | 第35-37页 |
| ·验证引物 | 第35-37页 |
| ·敲除组件的引物R1、R2 | 第37页 |
| ·GDH1基因敲除组件R1-R2的构建 | 第37-39页 |
| ·PCR获得敲除组件R1-R2 | 第37页 |
| ·TA克隆 | 第37页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定及测序 | 第37-39页 |
| ·敲除GDH1基因第一步 | 第39-42页 |
| ·影印平板法筛选转化子 | 第39页 |
| ·PCR验证转化子 | 第39-41页 |
| ·转化pSH65和Kan筛选标记切除 | 第41页 |
| ·PCR验证Kan~r抗性标记切除的菌株 | 第41-42页 |
| ·传代丢失质粒pSH65 | 第42页 |
| ·敲除GDH1基因第二步 | 第42-44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 第3章 菌株SS17生长和发酵特性的研究 | 第46-54页 |
| ·前言 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌种 | 第46页 |
| ·实验器材 | 第46页 |
| ·主要药品及溶液 | 第46-47页 |
| ·主要药品 | 第46-47页 |
| ·配制溶液 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·甘蔗汁的制备 | 第47页 |
| ·生长曲线 | 第47-48页 |
| ·发酵实验 | 第48-50页 |
| ·蔗汁发酵 | 第48页 |
| ·发酵液的酒精测定 | 第48页 |
| ·发酵液残糖的测定(3,5—二硝基水杨酸法(DNS法)) | 第48-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-52页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第50页 |
| ·发酵实验 | 第50-52页 |
| ·发酵液的酒精测定 | 第51-52页 |
| ·发酵液残糖的测定 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 附录1 符号缩略图 | 第56-58页 |
| 附录2 pUG6质粒图谱及序列 | 第58-60页 |
| 附录3 玻璃珠法提取酵母基因组DNA | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简历 | 第71-72页 |