| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| ·群体感应系统 | 第15-19页 |
| ·群体感应系统概述 | 第15-17页 |
| ·群体感应系统与病原菌致病 | 第17-18页 |
| ·嗜水气单胞菌菌的群体感应系统 | 第18-19页 |
| ·N-酰基高丝氨酸内酯酶 | 第19-23页 |
| ·N-酰基高丝氨酸内酯酶 | 第19-22页 |
| ·N-酰基高丝氨酸内酯酶的表达方式 | 第22页 |
| ·N-酰基高丝氨酸内酯酶的应用与群体感应淬灭策略 | 第22-23页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第23-24页 |
| ·毕赤酵母表达系统简介 | 第23-24页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 来源于芽孢杆菌(Bacillus sp.B546)的 N-酰基高丝氨 酸内酯酶基因全长的克隆及其分析 | 第26-36页 |
| ·试验材料 | 第26-27页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·试剂与工具酶 | 第26页 |
| ·溶液 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·引物合成 | 第27页 |
| ·主要试验仪器 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-31页 |
| ·N-酰基高丝氨酸内酯酶产生菌株的筛选 | 第27页 |
| ·分离菌株的产酶分析 | 第27-28页 |
| ·芽孢杆菌 B546 基因组的提取 | 第28-29页 |
| ·芽孢杆菌 B546 的 16S rDNA 鉴定 | 第29页 |
| ·简并引物的设计 | 第29页 |
| ·N-酰基高丝氨酸内酯酶基因aiiA_(B546) 的克隆 | 第29-30页 |
| ·aiiA_(B546) 基因片段的回收 | 第30页 |
| ·aiiA_(B546) 基因片段连接pEASY-T3 载体和转化Top10 感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·阳性重组子的筛选与鉴定 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·菌株的分离筛选与鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·芽孢杆菌 B546 的基因组提取 | 第32页 |
| ·芽孢杆菌 B546 的 16S rDNA 鉴定结果 | 第32页 |
| ·简并引物的设计 | 第32-33页 |
| ·N-酰基高丝氨酸内酯酶基因aiiA_(B546) 全长的克隆 | 第33-34页 |
| ·aiiA_(B546) 基因序列的分析与编码蛋白质三维结构的预测 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 N-酰基高丝氨酸内酯酶基因aiiA_(B546)在大肠杆菌中的表达 | 第36-45页 |
| ·试验材料 | 第36-37页 |
| ·菌株与质粒 | 第36页 |
| ·引物合成 | 第36页 |
| ·试剂与工具酶 | 第36页 |
| ·溶液 | 第36-37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·主要试验仪器 | 第37页 |
| ·试验方法 | 第37-42页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET-22b(+)-lic-aiiA_(B546) 的构建 | 第37-38页 |
| ·制备大肠杆菌感受态细胞和电击转化 | 第38-39页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 在大肠杆菌中的表达 | 第39-41页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 的纯化 | 第41-42页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 热稳定性的测定 | 第42页 |
| ·试验结果 | 第42-44页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET-22b(+)-lic-aiiA_(B546) 的构建 | 第42页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 在大肠杆菌中的表达 | 第42-43页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 活性的测定 | 第43页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 的纯化 | 第43页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 热稳定性的测定 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 N-酰基高丝氨酸内酯酶基因aiiA_(B546)的毕赤酵母表达、重组蛋白的纯化及酶学性质分析 | 第45-59页 |
| ·试验材料 | 第45-46页 |
| ·菌株与质粒 | 第45页 |
| ·引物合成 | 第45页 |
| ·试剂与工具酶 | 第45页 |
| ·溶液 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·主要试验仪器 | 第46页 |
| ·试验方法 | 第46-51页 |
| ·毕赤酵母表达载体pPIC9-aiiA_(B546) 的构建 | 第46-47页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备和电击转化 | 第47-49页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 在毕赤酵母中摇瓶水平的表达 | 第49页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 的纯化 | 第49-50页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 的性质测定 | 第50-51页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 的高密度发酵 | 第51页 |
| ·试验结果 | 第51-58页 |
| ·毕赤酵母表达载体pPIC9-aiiA_(B546) 的构建 | 第51-52页 |
| ·筛选具有N-酰基高丝氨酸内酯酶活性的转化子 | 第52页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 在摇瓶水平的表达与纯化 | 第52-53页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 的脱糖基化与鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 的酶学性质分析 | 第54-57页 |
| ·重组酶AiiA_(B546) 的高密度发酵 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 毕赤酵母表达的N-酰基高丝氨酸内酯酶AiiA_(B546)在水产养殖中的应用 | 第59-65页 |
| ·试验材料 | 第59页 |
| ·菌株与试验鱼 | 第59页 |
| ·试剂与工具酶 | 第59页 |
| ·溶液、培养基、鱼饲料与试验仪器 | 第59页 |
| ·试验方法 | 第59-62页 |
| ·锦鲤(Cyprinus carpio carpio)的饲养与管理 | 第59-60页 |
| ·嗜水气单胞菌ATCC 7966 的活化与毒力鉴定 | 第60页 |
| ·嗜水气单胞菌ATCC 7966 的信号分子检测 | 第60页 |
| ·嗜水气单胞菌ATCC 7966 的复壮 | 第60-61页 |
| ·嗜水气单胞菌ATCC 7966 的活体注射浓度的确定 | 第61页 |
| ·攻毒试验 | 第61-62页 |
| ·试验结果 | 第62-64页 |
| ·锦鲤鱼(Cyprinus carpio carpio)的饲养与管理 | 第62页 |
| ·嗜水气单胞菌ATCC 7966 的活化与鉴定 | 第62页 |
| ·嗜水气单胞菌ATCC 7966 的信号分子检测 | 第62-63页 |
| ·嗜水气单胞菌ATCC 7966 活体注射浓度的确定 | 第63页 |
| ·攻毒试验结果 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 第六章 讨论 | 第65-67页 |
| 第七章 全文结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76页 |
