| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-19页 |
| ·真菌病概况 | 第9页 |
| ·抗真菌药物研究现状 | 第9-11页 |
| ·抗菌肽简介 | 第11页 |
| ·嗜铬粒蛋白及其衍生多肽研究进展 | 第11-13页 |
| ·枯草杆菌表达系统的特点 | 第13-14页 |
| ·串联技术在基因工程表达小分子肽中的应用 | 第14-16页 |
| ·发酵条件优化在基因表达中的应用 | 第16-17页 |
| ·本论文研究的目的和主要内容 | 第17-19页 |
| ·本论文研究目的 | 第17页 |
| ·本论文主要实验内容 | 第17-19页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第19-31页 |
| ·实验材料 | 第19-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要溶液 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-31页 |
| ·大肠杆菌质粒的小量提取 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌质粒的大量提取 | 第25页 |
| ·PCR 反应 | 第25-26页 |
| ·DNA 酶切反应 | 第26页 |
| ·酶切片段的回收 | 第26-27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第27页 |
| ·枯草杆菌转化 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第28页 |
| ·基因序列分析 | 第28页 |
| ·CGA-N46 基因在Bacillus subtilis D81342 中的诱导表达 | 第28页 |
| ·分离小分子蛋白的SDS-PAGE | 第28-29页 |
| ·真菌孢子悬浮液的制备 | 第29-30页 |
| ·表达产物的抗真菌活性分析 | 第30-31页 |
| 第三章 结果与分析 | 第31-60页 |
| ·基因的克隆 | 第31-57页 |
| ·PCR 引物的合成 | 第31页 |
| ·PCR 扩增 | 第31-33页 |
| ·PCR 产物的TA 克隆 | 第33-38页 |
| ·双拷贝CGA-N46 基因重组T 载体的构建 | 第38-39页 |
| ·三拷贝CGA-N46 基因重组T 载体的构建 | 第39-41页 |
| ·单顺反子CGA-N46 基因重组表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·双顺反子CGA-N46 基因重组表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·三顺反子CGA-N46 基因重组表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·单、双、三顺反子CGA-N46 基因在枯草杆菌D81342 中的表达 | 第47-48页 |
| ·枯草杆菌工程菌表达条件优化 | 第48-53页 |
| ·发酵条件优化前后三顺反子CGA-N46 基因在枯草杆菌D81342 中表达量的比较 | 第53-54页 |
| ·CGA-N46 的抗真菌活性分析 | 第54-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·多顺反子表达系统的讨论 | 第57-58页 |
| ·表达条件优化的讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-68页 |
| 个人简历 | 第68页 |
