拟南芥芥子酶基因TGG1的克隆、表达和酶学特性研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1. 前言 | 第8-28页 |
| ·芥子酶防御系统研究进展 | 第8-19页 |
| ·芥子酶及其性质 | 第9-10页 |
| ·芥子酶在植物组织和细胞中定位 | 第10-11页 |
| ·芥子酶基因及其表达调控 | 第11-13页 |
| ·硫代葡萄糖苷的分布 | 第13-14页 |
| ·硫代葡萄糖苷及其降解产物 | 第14-15页 |
| ·硫代葡萄糖苷/芥子酶系统的起源进化 | 第15-16页 |
| ·硫代葡萄糖苷/芥子酶系统的功能作用 | 第16-19页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第19-26页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第19-20页 |
| ·酵母菌株 | 第20页 |
| ·表达载体 | 第20-21页 |
| ·影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的因素 | 第21-26页 |
| ·外源基因的内在特性 | 第21-22页 |
| ·表达框染色体整合位点 | 第22页 |
| ·宿主菌的甲醇利用表型 | 第22页 |
| ·基因剂量 | 第22-23页 |
| ·启动子 | 第23页 |
| ·信号肽的选择 | 第23-24页 |
| ·产物稳定性 | 第24页 |
| ·翻译后修饰 | 第24-25页 |
| ·外界环境因素 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的意义 | 第26-27页 |
| ·技术路线 | 第27-28页 |
| 2. 材料与方法 | 第28-37页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第28-29页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·主要仪器与设备 | 第28-29页 |
| ·酶与生化试剂 | 第29页 |
| ·常用培养基的配制 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-37页 |
| ·拟南芥芥子酶基因TGG1的克隆 | 第29-32页 |
| ·拟南芥叶片总RNA的提取 | 第30页 |
| ·TGG1 cDNA的合成 | 第30页 |
| ·特异引物的设计 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·测序鉴定 | 第32页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·PCR产物的纯化及与载体的连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第32-33页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第33页 |
| ·质粒的提取 | 第33页 |
| ·酶切鉴定和测序 | 第33-34页 |
| ·酵母转化 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母感受态的制备 | 第34页 |
| ·表达载体的线性化 | 第34-35页 |
| ·电击转化 | 第35页 |
| ·TGG1基因的酵母表达和酶蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第35-36页 |
| ·酶蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·芥子酶活性测定和TGG1酶学特性研究 | 第36-37页 |
| ·酶活性检测 | 第36页 |
| ·酶学特性分析 | 第36-37页 |
| 3. 结果与分析 | 第37-41页 |
| ·TGG1基因的克隆和表达载体构建 | 第37-38页 |
| ·TGG1酶蛋白的表达和纯化 | 第38-39页 |
| ·TGG1重组蛋白的酶学特性 | 第39-40页 |
| ·TGG1的动力学常数 | 第40-41页 |
| 4. 讨论 | 第41-42页 |
| 5. 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-54页 |
| 缩写词 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
