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拟南芥芥子酶基因TGG1的克隆、表达和酶学特性研究

摘要第1-5页
Abstract第5-8页
1. 前言第8-28页
     ·芥子酶防御系统研究进展第8-19页
     ·芥子酶及其性质第9-10页
     ·芥子酶在植物组织和细胞中定位第10-11页
     ·芥子酶基因及其表达调控第11-13页
     ·硫代葡萄糖苷的分布第13-14页
     ·硫代葡萄糖苷及其降解产物第14-15页
     ·硫代葡萄糖苷/芥子酶系统的起源进化第15-16页
     ·硫代葡萄糖苷/芥子酶系统的功能作用第16-19页
     ·毕赤酵母表达系统研究进展第19-26页
     ·毕赤酵母表达系统的优点第19-20页
     ·酵母菌株第20页
     ·表达载体第20-21页
     ·影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的因素第21-26页
       ·外源基因的内在特性第21-22页
       ·表达框染色体整合位点第22页
       ·宿主菌的甲醇利用表型第22页
       ·基因剂量第22-23页
       ·启动子第23页
       ·信号肽的选择第23-24页
       ·产物稳定性第24页
       ·翻译后修饰第24-25页
       ·外界环境因素第25-26页
     ·本研究的目的意义第26-27页
     ·技术路线第27-28页
2. 材料与方法第28-37页
     ·材料、试剂及仪器第28-29页
       ·植物材料第28页
       ·菌株与质粒第28页
       ·主要仪器与设备第28-29页
       ·酶与生化试剂第29页
     ·常用培养基的配制第29页
     ·实验方法第29-37页
       ·拟南芥芥子酶基因TGG1的克隆第29-32页
       ·拟南芥叶片总RNA的提取第30页
       ·TGG1 cDNA的合成第30页
       ·特异引物的设计第30-31页
       ·PCR扩增第31-32页
       ·测序鉴定第32页
       ·酵母表达载体的构建第32-34页
       ·PCR产物的纯化及与载体的连接第32页
       ·大肠杆菌感受态的制备第32-33页
       ·连接产物转化大肠杆菌第33页
       ·质粒的提取第33页
       ·酶切鉴定和测序第33-34页
       ·酵母转化第34-35页
       ·毕赤酵母感受态的制备第34页
       ·表达载体的线性化第34-35页
       ·电击转化第35页
       ·TGG1基因的酵母表达和酶蛋白的纯化第35-36页
       ·阳性克隆的筛选第35-36页
       ·酶蛋白的纯化第36页
       ·芥子酶活性测定和TGG1酶学特性研究第36-37页
       ·酶活性检测第36页
       ·酶学特性分析第36-37页
3. 结果与分析第37-41页
     ·TGG1基因的克隆和表达载体构建第37-38页
     ·TGG1酶蛋白的表达和纯化第38-39页
     ·TGG1重组蛋白的酶学特性第39-40页
     ·TGG1的动力学常数第40-41页
4. 讨论第41-42页
5. 结论第42-43页
参考文献第43-54页
缩写词第54-55页
致谢第55页

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