| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| ·转化酶的种类 | 第12-13页 |
| ·转化酶的结构特征 | 第13-15页 |
| ·转化酶的研究进展 | 第15-18页 |
| ·转化酶的生化特性 | 第15-16页 |
| ·酸性转化酶的生化特性 | 第15页 |
| ·中性或碱性转化酶的生化特性 | 第15-16页 |
| ·转化酶的生理功能 | 第16-18页 |
| ·酸性转化酶的生理功能 | 第16-17页 |
| ·中性或碱性转化酶的生理功能 | 第17-18页 |
| ·橡胶树中转化酶的研究背景 | 第18-20页 |
| ·橡胶的生物合成 | 第18页 |
| ·转化酶的研究 | 第18-20页 |
| ·本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| ·本研究的技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-43页 |
| ·材料与试剂 | 第22页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·质粒及菌种 | 第22页 |
| ·工具酶和试剂 | 第22页 |
| ·方法与步骤 | 第22-43页 |
| ·橡胶树胶乳转化酶基因克隆 | 第22-32页 |
| ·橡胶树RNA提取 | 第22-23页 |
| ·RNA甲醛变性电泳检测 | 第23-24页 |
| ·RNA浓度测定 | 第24页 |
| ·胶乳RNA中DNA的消化 | 第24页 |
| ·胶乳cDNA第一链合成 | 第24-25页 |
| ·转化酶基因保守片段获取 | 第25-28页 |
| ·转化酶基因5’RACE扩增 | 第28-30页 |
| ·转化酶基因3’RACE扩增 | 第30-31页 |
| ·转化酶基因cDNA全长扩增 | 第31-32页 |
| ·HbNIN1、2基因基因组克隆 | 第32-34页 |
| ·橡胶树叶片基因组DNA提取 | 第32页 |
| ·DNA电泳和浓度测定 | 第32页 |
| ·HbNIN1、2基因组的全长扩增 | 第32-34页 |
| ·Southern Blotting | 第34-36页 |
| ·橡胶树叶片基因组DNA提取 | 第34页 |
| ·基因组DNA的酶切消化 | 第34-35页 |
| ·酶切消化后基因组DNA的纯化 | 第35页 |
| ·DNA凝胶电泳和转膜 | 第35页 |
| ·HbNIN1、2基因探针制备 | 第35-36页 |
| ·Southern blotting分析 | 第36页 |
| ·橡胶树胶乳转化酶基因的实时荧光定量PCR表达分析 | 第36-37页 |
| ·未开割树胶乳采集 | 第36页 |
| ·机械伤害处理橡胶树胶乳采集 | 第36页 |
| ·不同组织橡胶树材料采集 | 第36-37页 |
| ·健康树和不同程度死皮树胶乳采集 | 第37页 |
| ·1.5%乙烯利刺激橡胶树胶乳采集 | 第37页 |
| ·甲基茉莉酸(JA)刺激橡胶树胶乳采集 | 第37页 |
| ·脱落酸(ABA)刺激橡胶树胶乳采集 | 第37页 |
| ·细胞分裂素(CTK)刺激橡胶树胶乳采集 | 第37页 |
| ·生长素(2,4-D)刺激橡胶树胶乳采集 | 第37页 |
| ·赤霉素(GA)刺激橡胶树胶乳采集 | 第37页 |
| ·水杨酸(SA)刺激橡胶树胶乳采集 | 第37页 |
| ·不同品系橡胶树胶乳采集 | 第37页 |
| ·同一品系不同单株橡胶树胶乳采集 | 第37页 |
| ·HbNIN1、2的原核表达及条件优化 | 第37-40页 |
| ·HbNIN1、2基因原核表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·HbNIN1、2原核表达条件筛选 | 第39页 |
| ·融合表达蛋白的SDS-PAGE检测 | 第39-40页 |
| ·HbNIN1和2体外活性研究 | 第40页 |
| ·IPTG诱导不同时间HbNIN蛋白活性测定 | 第40页 |
| ·不同pH条件下,HbNIN2蛋白活性研究 | 第40页 |
| ·不同反应温度条件下,HbNIN2蛋白活性研究 | 第40页 |
| ·不同底物浓度蔗糖下,HbNIN2蛋白活性研究 | 第40页 |
| ·不同果糖浓度下,HbNIN2蛋白活性研究 | 第40页 |
| ·HbNIN2基因启动子克隆 | 第40-43页 |
| ·橡胶树叶片基因组DNA提取 | 第40页 |
| ·构建GenomeWalker文库 | 第40-41页 |
| ·引物的设计 | 第41页 |
| ·从GenomevValker文库中进行PCR-based DNA Walking | 第41-42页 |
| ·PCR产物回收、连接及重组质粒的鉴定 | 第42页 |
| ·DNA的序列测定 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-75页 |
| ·橡胶树不同组织RNA的提取及检测 | 第43页 |
| ·橡胶树叶片DNA的提取及检测 | 第43页 |
| ·HbNIN基因全长cDNA的克隆及序列分析 | 第43-51页 |
| ·HbNIN基因保守区的扩增 | 第43-44页 |
| ·HbNIN1基因保守区扩增 | 第43-44页 |
| ·HbNIN2基因保守区获取 | 第44页 |
| ·HbNIN基因5’端序列的扩增 | 第44-45页 |
| ·HbNIN基因3’端序列的扩增 | 第45-46页 |
| ·HbNIN基因全长序列的克隆 | 第46-49页 |
| ·HbNIN基因的生物信息学分析 | 第49-51页 |
| ·HbNIN1和2的亚细胞定位预测 | 第49页 |
| ·序列比对与系统进化 | 第49-51页 |
| ·HbNIN基因的基因组克隆及序列分析 | 第51-56页 |
| ·HbNIN基因组分段扩增结果 | 第51-52页 |
| ·HbNIN基因组全长的扩增 | 第52-55页 |
| ·HbNIN基因结构分析 | 第55-56页 |
| ·HbNIN基因的Southern分析 | 第56-58页 |
| ·基因组DNA单酶切结果 | 第56-57页 |
| ·HbNIN基因探针的制备 | 第57-58页 |
| ·Southern Blotting分析 | 第58页 |
| ·HbNIN基因的表达分析 | 第58-64页 |
| ·不同组织中HbNIN基因表达的差异比较 | 第58-59页 |
| ·割胶对HbNIN基因表达的影响 | 第59页 |
| ·伤害处理对HbNIN基因表达的影响 | 第59-60页 |
| ·健康树和不同程度死皮树(TPD)中HbNIN基因表达的差异 | 第60页 |
| ·激素刺激对HbNIN基因表达的影响 | 第60-63页 |
| ·乙烯利(ET)刺激对HbNIN基因表达的影响 | 第60-61页 |
| ·甲基茉莉酸(MeJA)刺激对HbNIN基因表达的影响 | 第61页 |
| ·脱落酸(ABA)刺激对HbNIN基因表达的影响 | 第61-62页 |
| ·水杨酸(SA)刺激对HbNIN基因表达的影响 | 第62页 |
| ·细胞分裂素(CTK)、生长素(2,4-D)和赤霉素(GA)刺激对HbNIN基因表达的影响 | 第62-63页 |
| ·不同品系橡胶树中HbNIN基因表达的差异 | 第63页 |
| ·同一品系不同单株橡胶树中HbNIN基因表达的差异 | 第63-64页 |
| ·HbNIN基因的原核表达及条件优化 | 第64-68页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第64-65页 |
| ·HbNIN原核表达菌株的构建与鉴定 | 第65页 |
| ·原核表达条件的筛选 | 第65-68页 |
| ·诱导温度的筛选 | 第65-66页 |
| ·IPTG诱导浓度的筛选 | 第66-67页 |
| ·诱导时间的筛选 | 第67页 |
| ·最适诱导条件的表达 | 第67-68页 |
| ·HbNIN蛋白的体外酶活性检测 | 第68-71页 |
| ·诱导表达菌提取粗酶液活性检测 | 第68-69页 |
| ·不同pH条件下HbNIN2粗酶液活性研究 | 第69页 |
| ·不同反应温度条件下HbNIN2粗酶液活性研究 | 第69-70页 |
| ·不同反应底物蔗糖浓度对HbNIN2蛋白活性的影响 | 第70页 |
| ·不同果糖浓度对HbNIN2蛋白活性的抑制 | 第70-71页 |
| ·HbNIN2基因启动子克隆及序列分析 | 第71-75页 |
| ·HbNIN2基因启动子序列分离 | 第71-72页 |
| ·HbNIN2基因的启动子序列分析 | 第72-75页 |
| 4 结论与讨论 | 第75-78页 |
| ·结论 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-78页 |
| ·HbNIN1和2基因的表达分析 | 第75-76页 |
| ·HbNIN1和2基因的结构功能分析 | 第76-77页 |
| ·HbNIN1和2基因的生理功能探讨 | 第77页 |
| ·HbNIN2基因的进一步研究 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 作者在读期间科研成果简介 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
