| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章:文献综述 | 第12-30页 |
| ·燃料乙醇 | 第12-15页 |
| ·世界燃料乙醇产业概况 | 第12-13页 |
| ·我国乙醇产业的现状 | 第13-14页 |
| ·燃料乙醇的原料来源 | 第14页 |
| ·粮食类作物 | 第14页 |
| ·经济类作物 | 第14页 |
| ·纤维素类 | 第14页 |
| ·世界燃料乙醇的技术进展 | 第14-15页 |
| ·燃料乙醇与环境 | 第15页 |
| ·运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis | 第15-18页 |
| ·Zymomonas mobilis的介绍 | 第15-16页 |
| ·菌种的遗传工程的改良 | 第16-18页 |
| ·葡萄糖淀粉酶 | 第18-20页 |
| ·葡萄糖淀粉酶简介 | 第18-19页 |
| ·泡盛曲霉简介 | 第19-20页 |
| ·纤维素酶 | 第20-23页 |
| ·纤维素酶简介 | 第20-21页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第21-22页 |
| ·纤维素酶的前景 | 第22-23页 |
| ·瑞氏木酶内切葡聚糖酶 | 第23页 |
| ·木薯 | 第23-28页 |
| ·木薯的起源及分布 | 第23-24页 |
| ·木薯的生物学特性 | 第24-25页 |
| ·木薯的经济价值及用途 | 第25-28页 |
| ·作为粮食作物 | 第25-26页 |
| ·作为优质饲料 | 第26页 |
| ·作为工业原料 | 第26-27页 |
| ·作为生物质能源 | 第27-28页 |
| ·本课题的研究目的及研究内容 | 第28页 |
| ·研究目的 | 第28页 |
| ·研究意义 | 第28页 |
| ·研究内容 | 第28页 |
| ·本研究的技术路线 | 第28-30页 |
| 第二章:实验材料与方法 | 第30-50页 |
| ·实验材料 | 第30-35页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·酶活力测定试剂的配制 | 第31-32页 |
| ·DNS(二硝基水杨酸)法测定酶活力所需试剂的配制 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE所需试剂的配制 | 第33页 |
| ·木薯发酵所需试剂的配制 | 第33-34页 |
| ·酒精含量测定所需试剂的配制 | 第34页 |
| ·设备和仪器 | 第34-35页 |
| ·实验方法与步骤 | 第35-50页 |
| ·Z.mobilis的培养 | 第35-36页 |
| ·菌种的活化和保存 | 第35页 |
| ·Z.mobilis的培养条件 | 第35页 |
| ·Z.mobilis ATCC31821感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·基因操作 | 第36-38页 |
| ·Z.mobilis ATCC31821基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·Trichoderma viride AS3.3711和Aspergillus awamori AS3.2783总 | 第37页 |
| RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·引物的设计与合成 | 第38页 |
| ·PCR反应体系 | 第38-40页 |
| ·RT-PCR反应体系 | 第38-39页 |
| ·High Fidelity PCR Enzyme Mix反应体系 | 第39页 |
| ·PCR反应条件 | 第39-40页 |
| ·酶切反应 | 第40页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳及其DNA片段回收 | 第40-41页 |
| ·连接反应体系 | 第41页 |
| ·感受态的制备 | 第41-43页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第42页 |
| ·Z.mobilis ATCC31821感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·转化 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌转化方法 | 第43页 |
| ·Z.mobilis的电转化方法 | 第43-44页 |
| ·重组质粒在Z.mobilis内的稳定性检测 | 第44页 |
| ·质粒的提取 | 第44-45页 |
| ·粗酶夜的制备 | 第45-46页 |
| ·超声波处理菌体,制备粗酶液 | 第45页 |
| ·冷冻干燥浓缩法制备粗酶夜 | 第45-46页 |
| ·DNS法测定还原糖 | 第46-47页 |
| ·测定原理 | 第46页 |
| ·葡萄糖标准曲线的制备 | 第46-47页 |
| ·酶活力的测定 | 第47页 |
| ·内切葡聚糖酶(EGⅢ)活力测定 | 第47页 |
| ·葡萄糖淀粉酶(GA Ⅰ)活力测定 | 第47页 |
| ·酶活计算 | 第47页 |
| ·木薯粉发酵 | 第47-48页 |
| ·木薯粉中淀粉含量的测定 | 第48页 |
| ·液化 | 第48页 |
| ·糖化 | 第48页 |
| ·接种 | 第48页 |
| ·发酵 | 第48页 |
| ·发酵液中酒精的蒸馏 | 第48页 |
| ·发酵后残渣中淀粉含量的测定 | 第48页 |
| ·发酵液中酒精含量的测定 | 第48-50页 |
| ·测定原理 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49页 |
| ·计算 | 第49-50页 |
| 第三章:实验结果与讨论 | 第50-73页 |
| ·基因的克隆 | 第50-59页 |
| ·Z mobilis ATCC31821 pdc启动子的克隆 | 第50-51页 |
| ·Z.mobilis ATCC31821基因组DNA的提取与转录PCR | 第50页 |
| ·基因序列的测定 | 第50-51页 |
| ·信号肽的克隆 | 第51-52页 |
| ·启动子和信号肽的串联 | 第52页 |
| ·瑞氏木霉内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第52-55页 |
| ·瑞氏木霉总RNA的提取与反转录PCR | 第52-53页 |
| ·转化克隆的鉴定与测序 | 第53-54页 |
| ·瑞氏木霉内切葡聚糖酶基因EGⅢ的分析 | 第54-55页 |
| ·启动子、信号肽和内切葡聚糖酶基因EGⅢ的克隆 | 第55页 |
| ·泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶基因的克隆 | 第55-59页 |
| ·泡盛曲霉总RNA的提取与反转录PCR | 第56页 |
| ·转化克隆的鉴定与测序 | 第56-57页 |
| ·泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶基因GA Ⅰ的分析 | 第57-59页 |
| ·葡萄糖淀粉酶基因和终止子的克隆 | 第59页 |
| ·表达载体的构建 | 第59-63页 |
| ·表达载体的构建流程 | 第59-60页 |
| ·表达载体的构建 | 第60-63页 |
| ·表达载体pBPSG的构建与鉴定 | 第60-61页 |
| ·表达载体pBPSE的构建与鉴定 | 第61-62页 |
| ·表达载体pBPSGE的构建与鉴定 | 第62-63页 |
| ·内切葡聚糖酶基因和葡萄糖淀粉酶基因在运动发酵单胞菌中的表达 | 第63-65页 |
| ·pBPSG,pBPSE,pBPSGE转化Z.mobilis ATCC31821及转化子的鉴定 | 第63-64页 |
| ·Z.mobilis ATCC31821转化子表达蛋白SDS-PAGE电泳分析 | 第64-65页 |
| ·酶活最适温度的测定 | 第65-67页 |
| ·酶活最适pH的测定 | 第67-68页 |
| ·酶活力的测定 | 第68页 |
| ·木薯粉中淀粉的含量 | 第68-69页 |
| ·木薯发酵酒精含量的测定 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-73页 |
| ·内切葡聚糖酶和葡萄糖淀粉酶的选择 | 第69-70页 |
| ·表达载体的选择 | 第70页 |
| ·菌株的选择 | 第70页 |
| ·表达蛋白的酶活 | 第70-71页 |
| ·重组Z.mobilis的发酵 | 第71页 |
| ·本研究的后续工作 | 第71-73页 |
| 第四章:结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 缩略词 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
