| 摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-14页 |
| 1 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 乳酸菌概述 | 第15-16页 |
| 1.1.1 乳酸菌的特点及其生理功能简述 | 第15页 |
| 1.1.2 乳酸菌抗氧化活性概述 | 第15-16页 |
| 1.1.3 乳酸菌抗肠道感染的机理 | 第16页 |
| 1.2 产肠毒素大肠杆菌引起的断奶仔猪腹泻研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.1 断奶仔猪腹泻的危害 | 第16-17页 |
| 1.2.2 断奶仔猪腹泻与氧化应激 | 第17页 |
| 1.3 Nrf2信号通路的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 Nrf2概述 | 第17页 |
| 1.3.2 Nrf2抗氧化机制 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 1.5 研究技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-32页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 试验试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 试验动物 | 第21页 |
| 2.1.3 试验菌株与细胞株 | 第21页 |
| 2.1.4 引物合成 | 第21-23页 |
| 2.1.5 试验仪器和设备 | 第23页 |
| 2.2 乳酸菌分离 | 第23页 |
| 2.2.1 样品采集和乳酸菌的分离 | 第23页 |
| 2.2.2 乳酸菌的表型鉴定 | 第23页 |
| 2.3 乳酸菌体外益生特性筛选 | 第23-25页 |
| 2.3.1 酸耐受试验 | 第23-24页 |
| 2.3.2 耐胆盐试验 | 第24页 |
| 2.3.3 耐胰蛋白酶试验 | 第24页 |
| 2.3.4 抑菌试验 | 第24-25页 |
| 2.4 乳酸菌抗氧化试验 | 第25-26页 |
| 2.4.1 制备菌液上清及无细胞培养物 | 第25页 |
| 2.4.2 清除羟自由基能力(·OH)测定 | 第25页 |
| 2.4.3 清除二苯基三硝基苯脱自由基(DPPH)能力测定 | 第25页 |
| 2.4.4 清除ABTS自由基能力测定 | 第25页 |
| 2.4.5 清除超氧阴离子自由基能力测定 | 第25-26页 |
| 2.4.6 超氧化物歧化酶活性测定 | 第26页 |
| 2.4.7 过氧化氢耐受能力测定 | 第26页 |
| 2.5 乳酸菌分子生物学鉴定 | 第26页 |
| 2.6 乳酸菌药敏试验 | 第26页 |
| 2.7 乳酸菌细胞疏水性试验 | 第26-27页 |
| 2.8 溶血试验 | 第27页 |
| 2.9 小鼠安全性评价试验 | 第27页 |
| 2.10 乳酸菌提取组分的抗氧化活性 | 第27-28页 |
| 2.10.1 胞外多糖的提取 | 第27页 |
| 2.10.2 表面活性剂的提取 | 第27页 |
| 2.10.3 小分子蛋白的提取 | 第27-28页 |
| 2.10.4 不同乳酸菌各组分体外抗氧化能力的测定 | 第28页 |
| 2.11 IPEC-J2细胞的培养 | 第28页 |
| 2.12 H2O2对IPEC-J2细胞氧化损伤模型的建立 | 第28-30页 |
| 2.12.1 CCK-8筛选乳酸菌对正常细胞活性的影响 | 第28-29页 |
| 2.12.2 CCK-8筛选H2O2氧化应激诱导IPEC-J2细胞损伤的合适剂量及作用时间 | 第29页 |
| 2.12.3 建立H2O2氧化损伤IPEC-J2细胞模型 | 第29页 |
| 2.12.4 试剂盒检测细胞SOD、CAT、GSH、T-AOC活性及MDA、NO含量变化 | 第29页 |
| 2.12.5 mRNA表达水平的测定 | 第29-30页 |
| 2.13 K88对IPEC-J2细胞损伤模型的建立 | 第30-31页 |
| 2.13.1 CCK-8筛选K88感染IPEC-J2细胞损伤的合适剂量及作用时间 | 第30页 |
| 2.13.2 建立K88感染IPEC-J2细胞模型 | 第30页 |
| 2.13.3 试剂盒检测细胞SOD、CAT、GSH、T-AOC活性及MDA、NO含量变化 | 第30页 |
| 2.13.4 Nrf2及K88毒力因子mRNA表达水平的测定 | 第30页 |
| 2.13.5 Nrf2信号通路相关蛋白表达检测 | 第30-31页 |
| 2.14 试验数据的分析与统计 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-61页 |
| 3.1 乳酸菌的筛选结果 | 第32页 |
| 3.2 乳酸菌益生特性试验结果 | 第32-34页 |
| 3.2.1 强酸耐受性质试验结果 | 第32页 |
| 3.2.2 胆盐耐受性质测定结果 | 第32页 |
| 3.2.3 胰蛋白酶耐受性质测定结果 | 第32页 |
| 3.2.4 抑制细菌能力测定结果 | 第32-33页 |
| 3.2.5 体外抗氧化试验结果 | 第33-34页 |
| 3.3 分离菌株的分子生物学鉴定结果 | 第34页 |
| 3.4 乳酸菌药敏试验结果 | 第34页 |
| 3.5 乳酸菌细胞疏水性试验结果 | 第34页 |
| 3.6 溶血试验结果 | 第34-35页 |
| 3.7 小鼠安全性评价试验结果 | 第35页 |
| 3.8 不同乳酸菌各组分体外抗氧化能力的测定结果 | 第35页 |
| 3.8.1 胞外多糖体外抗氧化能力的测定结果 | 第35页 |
| 3.8.2 小分子蛋白体外抗氧化能力的测定结果 | 第35页 |
| 3.8.3 表面活性剂体外抗氧化能力的测定结果 | 第35页 |
| 3.9 乳酸菌对氧化损伤的IPEC-J2细胞的保护作用 | 第35-54页 |
| 3.9.1 乳酸菌对正常培养IPEC-J2细胞存活率的影响 | 第35-48页 |
| 3.9.2 镜下观察乳酸菌对IPEC-J2细胞形态学的影响 | 第48-49页 |
| 3.9.3 不同浓度H2O2对IPEC-J2细胞存活率的影响 | 第49-51页 |
| 3.9.4 H2O2氧化应激诱导IPEC-J2细胞损伤的形态学影响 | 第51页 |
| 3.9.5 乳酸菌对H2O2氧化应激诱导的IPEC-J2细胞损伤的形态学影响 | 第51-52页 |
| 3.9.6 乳酸菌对IPEC-J2细胞裂解液抗氧化活性的影响 | 第52页 |
| 3.9.7 mRNA表达检测结果 | 第52-54页 |
| 3.10 乳酸菌抗大肠杆菌K88感染IPEC-J2细胞损伤的保护作用 | 第54-61页 |
| 3.10.1 K88对IPEC-J2细胞存活率的影响 | 第54-55页 |
| 3.10.2 K88感染IPEC-J2细胞损伤的形态学影响 | 第55-56页 |
| 3.10.3 乳酸菌孵育后与K88对IPEC-J2细胞损伤的形态学影响 | 第56页 |
| 3.10.4 乳酸菌与K88孵育后对IPEC-J2细胞抗氧化活性的影响 | 第56-58页 |
| 3.10.5 mRNA表达检测结果 | 第58页 |
| 3.10.6 Nrf2信号通路蛋白表达检测结果 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-66页 |
| 4.1 课题设计思路 | 第61页 |
| 4.2 乳酸菌的益生特性 | 第61-62页 |
| 4.3 不同乳酸菌提取组分有不同的抗氧化活性 | 第62页 |
| 4.4 ETECK88感染细胞后不同时间变化规律 | 第62-63页 |
| 4.5 乳酸菌抗过氧化氢引起的氧化损伤的保护作用 | 第63-64页 |
| 4.6 乳酸菌抗ETECK88感染细胞损伤的保护作用 | 第64-66页 |
| 4.6.1 乳酸菌缓解细胞损伤导致的氧化应激 | 第64页 |
| 4.6.2 乳酸菌缓解细胞损伤导致的炎症反应 | 第64-65页 |
| 4.6.3 乳酸菌调节细菌毒力基因表达 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第75页 |
