| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第13-40页 |
| 1.1 板栗疫病菌的研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1.1 板栗疫病菌的分类、表型及现状 | 第13-14页 |
| 1.1.2 板栗疫病菌的生物防治现状 | 第14-15页 |
| 1.1.3 板栗疫病菌的致病机理 | 第15-20页 |
| 1.1.4 板栗疫病菌的分子生物学研究进展 | 第20-22页 |
| 1.2 丝状真菌的遗传转化研究进展 | 第22-26页 |
| 1.2.1 丝状真菌的遗传转化方法 | 第22-24页 |
| 1.2.2 真菌遗传转化系统的应用 | 第24-26页 |
| 1.3 农杆菌介导真菌遗传转化研究进展 | 第26-30页 |
| 1.3.1 农杆菌介导真菌遗传转化原理 | 第26页 |
| 1.3.2 农杆菌介导真菌遗传转化的影响因素 | 第26-28页 |
| 1.3.3 农杆菌介导真菌遗传转化方法 | 第28-29页 |
| 1.3.4 农杆菌介导真菌遗传转化应用及研究进展 | 第29-30页 |
| 1.3.5 ATMT应用于转化板栗疫病菌 | 第30页 |
| 1.4 T-DNA的插入特点 | 第30-34页 |
| 1.4.1 分析T-DNA插入位点的方法 | 第30-32页 |
| 1.4.2 T-DNA插入的特点 | 第32-34页 |
| 1.5 脯氨酸脱氢酶和P5C脱氢酶的研究进展 | 第34-39页 |
| 1.5.1 动物脯氨酸脱氢酶和P5C脱氢酶的研究进展 | 第34-35页 |
| 1.5.2 植物脯氨酸脱氢酶和P5C脱氢酶的研究进展 | 第35-37页 |
| 1.5.3 酿酒酵母脯氨酸脱氢酶和P5C脱氢酶的研究进展 | 第37-38页 |
| 1.5.4 细菌脯氨酸利用蛋白PutA的研究进展 | 第38-39页 |
| 1.6 本研究的主要内容及意义 | 第39-40页 |
| 第二章 材料与方法 | 第40-63页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-43页 |
| 2.1.1 菌株、菌株的保存及培养 | 第40-42页 |
| 2.1.2 质粒 | 第42-43页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-63页 |
| 2.2.1 PCR扩增 | 第43-44页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建及鉴定 | 第44-47页 |
| 2.2.3 农杆菌介导的板栗疫病菌转化 | 第47-48页 |
| 2.2.4 总DNA的提取 | 第48-49页 |
| 2.2.5 Southern杂交分析 | 第49-51页 |
| 2.2.6 TAIL-PCR | 第51-52页 |
| 2.2.7 总RNA的提取 | 第52-53页 |
| 2.2.8 病毒dsRNA的纯化 | 第53页 |
| 2.2.9 cDNA第一链合成 | 第53页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR分析 | 第53-54页 |
| 2.2.11 转录组测序及数据分析 | 第54页 |
| 2.2.12 系统进化树分析 | 第54页 |
| 2.2.13 融合PCR构建同源重组缺失用片段 | 第54-56页 |
| 2.2.14 板栗疫病菌的转化 | 第56-57页 |
| 2.2.15 板栗疫病菌在PDA培养基上的生长 | 第57-58页 |
| 2.2.16 板栗疫病菌分生孢子产量统计 | 第58页 |
| 2.2.17 板栗疫病菌对渗透压及盐压敏感性试验 | 第58页 |
| 2.2.18 板栗疫病菌漆酶活性测定 | 第58页 |
| 2.2.19 板栗疫病菌致病力检测 | 第58-59页 |
| 2.2.20 蛋白的原核表达及亲和纯化 | 第59-60页 |
| 2.2.21 Bradford法定量蛋白浓度 | 第60页 |
| 2.2.22 功能互补酿酒酵母突变体 | 第60-61页 |
| 2.2.23 板栗疫病菌菌丝体Prodh酶活和P5Cdh酶活检测 | 第61-62页 |
| 2.2.24 板栗疫病菌菌丝体内proline累积量及P5C累积量检测 | 第62-63页 |
| 第三章 根癌农杆菌介导转化法构建板栗疫病菌突变体 | 第63-78页 |
| 3.1 根癌农杆菌介导转化法构建板栗疫病菌突变体 | 第63-70页 |
| 3.1.1 双元载体的改造 | 第63-64页 |
| 3.1.2 根癌农杆菌介导转化板栗疫病菌EP155 | 第64-65页 |
| 3.1.3 转化株遗传稳定性分析 | 第65-66页 |
| 3.1.4 转化株的PCR分析 | 第66-67页 |
| 3.1.5 转化株的Southern杂交分析 | 第67页 |
| 3.1.6 转化株按表型分类 | 第67-70页 |
| 3.2 T-DNA插入特点分析 | 第70-76页 |
| 3.2.1 TAIL-PCR分析T-DNA插入位点 | 第70-73页 |
| 3.2.2 T-DNA插入板栗疫病菌基因组特点 | 第73-76页 |
| 3.3 讨论 | 第76-78页 |
| 第四章 板栗疫病菌脯氨酸代谢途径与致病力关系研究 | 第78-122页 |
| 4.1 板栗疫病菌TDNA插入突变体77HE12的突变位点分析 | 第78-81页 |
| 4.2 板栗疫病菌Prodh基因与P5Cdh基因的功能鉴定 | 第81-94页 |
| 4.2.1 板栗疫病菌Prodh的基因分析 | 第81-83页 |
| 4.2.2 板栗疫病菌Prodh基因功能互补酿酒酵母突变体△put1 | 第83-86页 |
| 4.2.3 板栗疫病菌P5Cdh基因序列分析及功能互补酿酒酵母突变体△put2 | 第86-90页 |
| 4.2.4 板栗疫病菌Prodh蛋白的原核表达、纯化及酶活检测 | 第90-92页 |
| 4.2.5 板栗疫病菌P5Cdh蛋白的原核表达、纯化及酶活检测 | 第92-94页 |
| 4.3 板栗疫病菌脯氨酸代谢途径与致病力关系研究 | 第94-117页 |
| 4.3.1 板栗疫病菌Prodh基因和P5Cdh基因的缺失突变体构建 | 第94-97页 |
| 4.3.2 板栗疫病菌Prodh基因和P5Cdh基因的缺失突变体表型观察 | 第97-98页 |
| 4.3.3 外源proline的添加对突变体△prodh和△p5cdh的影响 | 第98-99页 |
| 4.3.4 渗透压力和高盐压力对突变体△prodh和△p5cdh的影响 | 第99-101页 |
| 4.3.5 体内proline及P5C的累积水平对板栗疫病菌的影响 | 第101-103页 |
| 4.3.6 板栗疫病菌菌丝体Prodh及P5Cdh的酶活检测 | 第103-104页 |
| 4.3.7 板栗疫病菌脯氨酸代谢途径其它关键基因的缺失突变体构建 | 第104-109页 |
| 4.3.8 板栗疫病菌脯氨酸代谢途径基因缺失突变体的产孢量和致病力检测 | 第109-111页 |
| 4.3.9 突变体△pro1和△pro2的渗透压和盐压敏感性实验 | 第111-114页 |
| 4.3.10 定量PCR分析△prodh和△p5cdh的致病力基因转录水平 | 第114-115页 |
| 4.3.11 低毒病毒CHV1-EP713抑制基因Prodh及P5Cdh的转录 | 第115-117页 |
| 4.4 讨论 | 第117-122页 |
| 第五章 结论与展望 | 第122-124页 |
| 5.1 结论 | 第122-123页 |
| 5.2 工作展望 | 第123-124页 |
| 附章 板栗疫病菌Npr2基因的功能研究 | 第124-154页 |
| 1 氮源通透酶调节子的研究进展 | 第124-126页 |
| 2 板栗疫病菌T-DNA插入突变体55HC01的突变位点分析 | 第126-129页 |
| 3 板栗疫病菌Npr2基因的功能研究 | 第129-150页 |
| 3.1 板栗疫病菌Npr2基因的功能结构域和同源性分析 | 第129-131页 |
| 3.2 板栗疫病菌Npr2基因在EP155和EP713中的转录水平 | 第131页 |
| 3.3 板栗疫病菌Npr2基因缺失突变体的构建 | 第131-133页 |
| 3.4 板栗疫病菌Npr2基因缺失突变体表型观察 | 第133-135页 |
| 3.5 板栗疫病菌Npr2基因缺失突变体产孢量和致病力分析 | 第135-136页 |
| 3.6 板栗疫病菌Npr2基因缺失突变体支持病毒复制 | 第136-137页 |
| 3.7 板栗疫病菌Npr2基因缺失突变体对渗透压敏感性实验 | 第137页 |
| 3.8 板栗疫病菌Npr2基因缺失突变体漆酶活性测定 | 第137-138页 |
| 3.9 板栗疫病菌Npr2基因缺失突变体转录组的初步分析 | 第138-150页 |
| 4 讨论 | 第150-153页 |
| 5 结论与展望 | 第153-154页 |
| 参考文献 | 第154-169页 |
| 附录 | 第169-173页 |
| 致谢 | 第173页 |
