| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 缩略词 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-37页 |
| 1. 立题的背景意义 | 第17-18页 |
| 2. 国内外的研究现状 | 第18-37页 |
| 2.1 水稻耐储藏的研究进展 | 第18-22页 |
| 2.1.1 稻谷储藏方式 | 第18-19页 |
| 2.1.2 水稻耐储藏性的评价体系 | 第19-20页 |
| 2.1.3 水稻耐储藏性的研究方法 | 第20页 |
| 2.1.4 水稻种子老化的机制 | 第20-21页 |
| 2.1.5 水稻种子耐储藏性的遗传学基础 | 第21页 |
| 2.1.6 脂肪氧化酶与水稻耐储藏性 | 第21-22页 |
| 2.2 植物脂肪氧化酶的研究进展 | 第22-29页 |
| 2.2.1 脂肪氧化酶简介 | 第22-24页 |
| 2.2.2 脂肪氧化酶的生化特性 | 第24-25页 |
| 2.2.3 脂肪氧化酶的测定方法 | 第25页 |
| 2.2.4 脂肪氧化酶的主要功能 | 第25-29页 |
| 2.3 选择标记基因删除技术的研究进展 | 第29-33页 |
| 2.3.1 获得无选择标记基因作物的主要方法 | 第29-33页 |
| 2.4 蛋白质组学的研究进展 | 第33-37页 |
| 2.4.1 蛋白质组学研究方法 | 第33-35页 |
| 2.4.2 水稻蛋白质组学 | 第35-37页 |
| 第二章 农杆菌介导籼稻的遗传转化 | 第37-56页 |
| 1. 材料与方法 | 第38-48页 |
| 1.1 植物材料 | 第38页 |
| 1.2 载体 | 第38页 |
| 1.3 药品和试剂 | 第38-39页 |
| 1.4 主要仪器 | 第39页 |
| 1.5 培养基 | 第39-40页 |
| 1.6 实验方法 | 第40-48页 |
| 1.6.1 水稻愈伤组织的诱导和继代 | 第40页 |
| 1.6.2 农杆菌转化水稻 | 第40-41页 |
| 1.6.3 水稻基因组DNA提取 | 第41页 |
| 1.6.4 水稻总RNA提取 | 第41-42页 |
| 1.6.5 碱裂解法质粒提取 | 第42页 |
| 1.6.6 转基因植株的PCR检测 | 第42-43页 |
| 1.6.7 转基因植株的Southern blot检测 | 第43-46页 |
| 1.6.8 转基因T_1代种子的PPT筛选 | 第46页 |
| 1.6.9 水稻种胚LOX-3的表达量分析 | 第46-47页 |
| 1.6.10 转基因T_3代植株的表型分析 | 第47-48页 |
| 2. 结果与分析 | 第48-53页 |
| 2.1 农杆菌介导籼稻的遗传转化 | 第48-49页 |
| 2.2 抗性植株的分子检测 | 第49-51页 |
| 2.3 转基因植株T_1代种子的PPT筛选 | 第51-52页 |
| 2.4 水稻种胚LOX-3的表达量分析 | 第52-53页 |
| 2.5 转基因T_3代植株的表型分析 | 第53页 |
| 3. 讨论 | 第53-56页 |
| 第三章 水稻种胚脂肪氧化酶活性分析 | 第56-64页 |
| 1. 材料与方法 | 第57-60页 |
| 1.1 植物材料 | 第57页 |
| 1.2 试剂 | 第57-58页 |
| 1.3 脂肪氧化酶的定性分析 | 第58-59页 |
| 1.4 分光光度法检测脂肪氧化酶活性 | 第59页 |
| 1.5 高效液相色谱法测定谷物中亚油酸含量 | 第59-60页 |
| 1.5.1 色谱条件 | 第59-60页 |
| 1.5.2 样品前处理 | 第60页 |
| 1.5.3 标准曲线的制作 | 第60页 |
| 1.5.4 样品LA含量测定 | 第60页 |
| 2. 结果与分析 | 第60-62页 |
| 2.1 脂肪氧化酶的定性分析 | 第60-61页 |
| 2.2 高效液相色谱法测定谷物中亚油酸含量 | 第61-62页 |
| 2.2.1 标准样品的线性关系 | 第61-62页 |
| 2.2.2 转基因水稻与对照中LA含量对比 | 第62页 |
| 3. 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 转基因水稻种子人工老化与自然老化生理学分析 | 第64-76页 |
| 1. 材料与方法 | 第65-67页 |
| 1.1 植物材料 | 第65页 |
| 1.2 实验试剂 | 第65页 |
| 1.3 实验器材 | 第65页 |
| 1.4 方法 | 第65-67页 |
| 1.4.1 转基因植株与对照种子的人工老化实验 | 第65-66页 |
| 1.4.2 转基因植株与对照种子的自然老化实验 | 第66页 |
| 1.4.3 老化种子的发芽实验 | 第66页 |
| 1.4.4 人工老化20d水稻植株中LOX-3的表达分析 | 第66-67页 |
| 1.4.5 水稻种胚扫描电镜分析 | 第67页 |
| 1.4.6 米质分析 | 第67页 |
| 2. 结果与分析 | 第67-75页 |
| 2.1 老化种子的发芽实验 | 第67-68页 |
| 2.2 转基因水稻种子与对照的人工老化实验 | 第68-69页 |
| 2.3 转基因水稻种子与对照的自然老化实验 | 第69-71页 |
| 2.4 人工老化20d水稻植株中LOX-3的表达分析 | 第71-72页 |
| 2.5 水稻种胚扫描电镜分析 | 第72-73页 |
| 2.6 米质分析 | 第73-75页 |
| 3. 结论 | 第75-76页 |
| 第五章 转基因水稻种子蛋白质组学分析 | 第76-100页 |
| 1. 材料和方法 | 第78-83页 |
| 1.1 植物材料 | 第78页 |
| 1.2 实验试剂 | 第78页 |
| 1.3 主要仪器 | 第78-79页 |
| 1.4 实验方法 | 第79-83页 |
| 1.4.1 样品处理 | 第79页 |
| 1.4.2 水稻种胚蛋白提取 | 第79-80页 |
| 1.4.3 蛋白质浓度测定 | 第80页 |
| 1.4.4 SDS-PAGE电泳 | 第80页 |
| 1.4.5 蛋白质酶解 | 第80-81页 |
| 1.4.6 iTRAQ标记 | 第81-82页 |
| 1.4.7 SCX分离 | 第82页 |
| 1.4.8 基于QE的液质联用分析 | 第82-83页 |
| 2. 结果与分析 | 第83-98页 |
| 2.1 SDS-PAGE电泳 | 第83页 |
| 2.2 iTRAQ蛋白鉴定 | 第83-98页 |
| 2.2.1 鉴定质量评估 | 第83-84页 |
| 2.2.2 蛋白质鉴定 | 第84-87页 |
| 2.2.3 蛋白质定量 | 第87-89页 |
| 2.2.4 GO注释分析 | 第89-91页 |
| 2.2.5 COG注释分析 | 第91-93页 |
| 2.2.6 KEGG代谢通路分析 | 第93-98页 |
| 2.2.7 多样品间表达模式聚类分析 | 第98页 |
| 3. 结论 | 第98-100页 |
| 第六章 热激删除转基因株系中的标记基因 | 第100-109页 |
| 1. 材料与方法 | 第101-103页 |
| 1.1 材料 | 第101页 |
| 1.2 对比不同热激方法标记基因的删除效率 | 第101-102页 |
| 1.3 热激处理后转基因植株中标记基因的PCR检测 | 第102页 |
| 1.4 热激处理后转基因植株中标记基因的RT-PCR检测 | 第102-103页 |
| 1.5 热激处理后转基因植株中标记基因的Southern杂交检测 | 第103页 |
| 2. 结果与分析 | 第103-107页 |
| 2.1 不同的热激方案删除效率对比 | 第103-104页 |
| 2.2 热激敲除转基因后代植株种子中的标记基因Bar | 第104页 |
| 2.3 热激处理后转基因植株中标记基因的PCR检测 | 第104-105页 |
| 2.4 热激处理后转基因植株中标记基因的RT-PCR检测 | 第105-106页 |
| 2.5 热激处理后转基因植株中标记基因的Southern杂交检测 | 第106-107页 |
| 3. 结论 | 第107-109页 |
| 第七章 结论 | 第109-112页 |
| 1. 全文总结 | 第109-112页 |
| 1.1 农杆菌介导籼稻的遗传转化 | 第109页 |
| 1.2 水稻种胚脂肪氧化酶含量检测及活性分析 | 第109-110页 |
| 1.3 水稻种子人工老化与自然老化实验 | 第110-111页 |
| 1.4 水稻种子蛋白质组学分析 | 第111页 |
| 1.5 热激删除转基因植株中的标记基因 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-130页 |
| 附录1. 载体示意图 | 第130-131页 |
| 附录2. 相关基因序列 | 第131-133页 |
| 附录3. 几种主要培养基的配方 | 第133-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
