| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-15页 |
| 1.1.1 小麦赤霉病危害 | 第13-14页 |
| 1.1.2 小麦赤霉病的防治 | 第14-15页 |
| 1.2 小麦转基因技术的国内外研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 基因枪转化法 | 第15-16页 |
| 1.2.2 农杆菌转化法 | 第16-17页 |
| 1.2.3 花粉管通道法 | 第17-18页 |
| 1.2.4 其它转化方法 | 第18页 |
| 1.3 筛选标记基因及筛选体系 | 第18-19页 |
| 1.3.1 PMI/甘露糖筛选体系 | 第18-19页 |
| 1.3.2 Bar/Bialaphos筛选体系 | 第19页 |
| 1.4 小麦抗赤霉病相关基因 | 第19-20页 |
| 1.5 RNAi作用机理及其应用 | 第20-21页 |
| 1.6 乙醇酸途径相关基因 | 第21-22页 |
| 1.7 最小表达框及多基因共转化 | 第22页 |
| 1.7.1 最小表达框 | 第22页 |
| 1.7.2 多基因共转化 | 第22页 |
| 1.8 研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 2 实验材料与方法 | 第24-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 实验主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.2 材料及菌株 | 第24页 |
| 2.1.3 相关试剂及配制 | 第24-25页 |
| 2.1.4 菌株培养所用培养基 | 第25页 |
| 2.1.5 小麦遗传转化所用培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.6 PCR及RT-PCR试剂 | 第26页 |
| 2.1.7 试剂盒和限制性内切酶 | 第26页 |
| 2.1.8 赤霉病菌接种和鉴定相关培养基配制 | 第26页 |
| 2.1.9 PCR及RT-PCR引物 | 第26-28页 |
| 2.2 基因枪轰击法流程 | 第28-31页 |
| 2.2.1 转化最小表达框的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.2 襄麦76转化受体的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.3 DNA“微弹”的制备 | 第30页 |
| 2.2.4 基因枪轰击、愈伤组织的再生及筛选 | 第30-31页 |
| 2.3 农杆菌介导法实验流程 | 第31-33页 |
| 2.3.1 转化子的制备及菌体DNA提取 | 第31页 |
| 2.3.2 菌体PCR鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.3 农杆菌浸染及愈伤组织的再生及筛选 | 第32-33页 |
| 2.4 转基因材料的分子鉴定及表型鉴定方法 | 第33-36页 |
| 2.4.1 转基因小麦叶片DNA的提取 | 第33页 |
| 2.4.2 转基因小麦的PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.4.3 转基因小麦的RT-PCR鉴定 | 第33-35页 |
| 2.4.4 田间赤霉病抗性鉴定 | 第35页 |
| 2.4.5 幼胚一步成苗快速加代法 | 第35页 |
| 2.4.6 小麦杂交技术 | 第35-36页 |
| 2.5 统计分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-66页 |
| 3.1 最小表达框DNA的制备 | 第37-38页 |
| 3.2 基因枪介导法Bar标记阳性植株的筛选 | 第38-42页 |
| 3.2.1 转AFP2及Hvchi基因株系PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 襄麦76转RNAi-gls及RNAi-chs3b基因植株的分子鉴定 | 第40-42页 |
| 3.3 基因枪介导法PMI标记阳性植株的筛选 | 第42-57页 |
| 3.3.1 襄麦76转FENB基因植株的分子鉴定 | 第44-47页 |
| 3.3.2 转chs3bAS5-chs3bAS1、chs3bAS2-chs3bAS3基因植株的鉴定 | 第47-53页 |
| 3.3.3 转glsAS3-glsAS6,chs3bAS5-chs3bAS1和chs3bAS2-chs3bAS3基因植株的分子鉴定 | 第53-56页 |
| 3.3.4 转GlsAS3-GlsAS6 (tRNA)和6×Chs3bAS5-2基因植株的鉴定 | 第56-57页 |
| 3.4 农杆菌介导法获得转基因植株的PCR鉴定 | 第57-60页 |
| 3.4.1 农杆菌转化子菌体PCR鉴定 | 第57-58页 |
| 3.4.2 农杆菌介导法PMI标记阳性植株的筛选 | 第58-59页 |
| 3.4.3 扬麦158转TamiR(4)基因植株T0代PCR鉴定 | 第59-60页 |
| 3.5 襄麦76转乙醇酸途径基因植株的分子鉴定 | 第60-66页 |
| 3.5.1 转AtGDH, GcL及TsR基因高世代材料的分子鉴定 | 第60-62页 |
| 3.5.2 襄麦76转DEF及UEch42基因高世代材料的分子鉴定 | 第62-64页 |
| 3.5.3 转DEF及UEch42基因低世代材料的鉴定 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 4.1 多基因共转化小麦后代遗传分析 | 第66-67页 |
| 4.2 PMI与Bar筛选标记的区别 | 第67页 |
| 4.3 Ti质粒重组片段大小的分析 | 第67页 |
| 4.4 赤霉病抗性接种鉴定分析 | 第67-68页 |
| 4.5 转乙醇酸途径基因材料的分析 | 第68页 |
| 5 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
