摘要 | 第7-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
缩略语表 | 第10-11页 |
1 前言 | 第11-22页 |
1.1 小麦赤霉病概述 | 第11页 |
1.2 小麦遗传转化 | 第11-14页 |
1.2.1 小麦基因枪转化 | 第11-12页 |
1.2.2 影响基因枪转化效率的因素 | 第12-13页 |
1.2.3 最小表达框技术的应用 | 第13页 |
1.2.4 小麦农杆菌转化 | 第13-14页 |
1.2.5 其他转化方法 | 第14页 |
1.3 筛选标记基因 | 第14-15页 |
1.3.1 筛选标记基因Bar | 第14-15页 |
1.3.2 筛选标记基因Pmi | 第15页 |
1.4 小麦抗赤霉病基因工程 | 第15-17页 |
1.4.1 抗菌肽 | 第16页 |
1.4.2 抗菌蛋白 | 第16-17页 |
1.4.3 抗体融合蛋白 | 第17页 |
1.4.4 RNAi技术在小麦抗赤霉病育种中的应用 | 第17页 |
1.5 丰原素(Fengycin)相关研究 | 第17-20页 |
1.5.1 Fengycin概述 | 第18页 |
1.5.2 Fengycin合成酶 | 第18-19页 |
1.5.3 Fengycin合成酶各基因的功能 | 第19页 |
1.5.4 Fengycin的抑菌机理 | 第19-20页 |
1.6 多基因聚合育种 | 第20-21页 |
1.6.1 植物多基因共转化 | 第20页 |
1.6.2 基因聚合杂交 | 第20-21页 |
1.7 研究目的和意义 | 第21-22页 |
2 实验材料与方法 | 第22-32页 |
2.1 实验材料 | 第22-25页 |
2.1.1 实验主要仪器及设备 | 第22页 |
2.1.2 菌株和质粒 | 第22页 |
2.1.3 菌体扩大培养所用培养基 | 第22页 |
2.1.4 DNA提取相关试剂 | 第22-23页 |
2.1.5 试剂盒和限制性内切酶 | 第23页 |
2.1.6 转化基因 | 第23页 |
2.1.7 小麦幼胚愈伤转化所用培养基 | 第23页 |
2.1.8 小麦材料 | 第23-24页 |
2.1.9 引物 | 第24-25页 |
2.2 实验方法 | 第25-32页 |
2.2.1 基因枪转化片段的制备 | 第25-27页 |
2.2.2 转化受体的准备 | 第27页 |
2.2.3 幼胚愈伤的高渗处理及基因枪轰击 | 第27-28页 |
2.2.4 幼胚愈伤的恢复培养 | 第28页 |
2.2.5 愈伤组织的再生及筛选 | 第28页 |
2.2.6 小麦基因组DNA提取试剂的配制 | 第28-29页 |
2.2.7 转基因小麦叶片DNA的提取 | 第29页 |
2.2.8 转基因小麦的PCR鉴定 | 第29-30页 |
2.2.9 转基因材料快速加代法 | 第30页 |
2.2.10 转丰原素基因材料聚合杂交育种 | 第30-32页 |
3 结果与分析 | 第32-50页 |
3.1 最小表达框的制备 | 第32-33页 |
3.2 Bar筛选体系下襄麦76幼胚基因枪转化 | 第33-36页 |
3.2.1 小麦幼胚基因枪转化及阳性植株的获得 | 第33-34页 |
3.2.2 转RNAi- Chs3bAs2As3基因材料的获得和PCR鉴定 | 第34-36页 |
3.3 Pmi筛选体系下襄麦76幼胚的基因枪转化 | 第36-43页 |
3.3.1 小麦幼胚转化和转基因植株的获得 | 第36-38页 |
3.3.2 转RNAi-Chs3bAs5As1基因材料的获得和PCR鉴定 | 第38-40页 |
3.3.3 转RNAi-Chs3bAs2As3基因材料的获得和PCR鉴定 | 第40-43页 |
3.4 转丰原素基因高世代材料聚合杂交 | 第43-50页 |
3.4.1 高世代转基因材料PCR鉴定 | 第43-44页 |
3.4.2 基因聚合材料的组配 | 第44页 |
3.4.3 加代及聚合杂交材料PCR鉴定 | 第44-45页 |
3.4.4 聚合杂交材料及加代材料的组配 | 第45-46页 |
3.4.5 第二轮聚合材料PCR鉴定 | 第46-49页 |
3.4.6 丰原素基因聚合杂交在不同世代的遗传组成 | 第49-50页 |
4 讨论 | 第50-53页 |
4.1 小麦遗传转化是提高抗赤霉病分子育种的有效手段 | 第50-51页 |
4.2 聚合丰原素基因有望获得抗赤霉病资源 | 第51-53页 |
参考文献 | 第53-61页 |
致谢 | 第61页 |