| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 小麦转基因技术研究背景 | 第12页 |
| 1.2 小麦遗传转化方法 | 第12-16页 |
| 1.2.1 基因枪介导法 | 第13-15页 |
| 1.2.2 农杆菌转化法 | 第15-16页 |
| 1.2.3 其他转化方法在小麦遗传转化中应用 | 第16页 |
| 1.3 遗传转化中的筛选标记基因 | 第16-18页 |
| 1.3.1 Bar基因在小麦遗传转化中的应用 | 第16-17页 |
| 1.3.2 PMI基因在小麦遗传转化中的应用 | 第17-18页 |
| 1.4 小麦抗赤霉病工程研究进展 | 第18-22页 |
| 1.4.1 HIGS技术在植物抗病领域应用 | 第20页 |
| 1.4.2 小麦抗赤霉病工程相关RNAi构建体 | 第20-22页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 菌体扩大培养所用培养基 | 第23页 |
| 2.1.3 实验试剂及药品 | 第23-24页 |
| 2.1.4 小麦幼胚愈伤转化所用培养基 | 第24页 |
| 2.1.5 引物 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 幼胚接种和培养 | 第26页 |
| 2.2.2 质粒DNA提取试剂的配制 | 第26页 |
| 2.2.3 质粒DNA的提取 | 第26-28页 |
| 2.2.4 DNA片段回收 | 第28页 |
| 2.2.5 幼胚愈伤的高渗处理及基因枪轰击 | 第28-29页 |
| 2.2.6 幼胚愈伤的恢复培养及植株再生 | 第29页 |
| 2.2.7 小麦基因组DNA提取试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2.2.8 小麦叶片DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.9 抗性植株的PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.2.10 单花接种鉴定转基因小麦赤霉病抗性 | 第31-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-57页 |
| 3.1 最小表达框的制备 | 第33-34页 |
| 3.2 用于基因枪转化的基因 | 第34页 |
| 3.3 转Chs7As3As4基因小麦材料筛选鉴定 | 第34-42页 |
| 3.3.1 愈伤转化和阳性转基因植株的获得 | 第34-36页 |
| 3.3.2 转基因小麦T_0代PCR鉴定 | 第36页 |
| 3.3.3 转基因小麦T_1、T_2代PCR鉴定 | 第36-38页 |
| 3.3.4 转基因小麦T_3代PCR鉴定 | 第38页 |
| 3.3.5 转基因植株T_3代室内单花接种鉴定 | 第38-40页 |
| 3.3.6 转基因小麦T_4代PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.7 转基因植株后代表型变化分析 | 第41-42页 |
| 3.4 转Chs3b和CYP51BAC基因小麦材料的筛选与鉴定 | 第42-46页 |
| 3.4.1 基因枪介导的小麦转化和阳性植株的获得 | 第42-43页 |
| 3.4.2 转基因小麦T_0代PCR鉴定 | 第43页 |
| 3.4.3 转基因小麦T_1代PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4.4 转基因小麦T_2代PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.5 转基因小麦T_3代PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 3.5 转Chs3b和GLS基因小麦材料筛选与鉴定 | 第46-48页 |
| 3.5.1 基因枪介导的小麦转化和阳性植株的获得 | 第46页 |
| 3.5.2 转基因小麦T_0代PCR鉴定 | 第46页 |
| 3.5.3 转基因小麦T_1代PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.5.4 转基因小麦T_2代PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 3.6 转GLS基因小麦材料筛选与鉴定 | 第48-49页 |
| 3.6.1 基因枪介导的小麦转化和阳性植株的获得 | 第48页 |
| 3.6.2 转基因植株T_0代PCR鉴定 | 第48-49页 |
| 3.6.3 转基因植株T_1代PCR鉴定 | 第49页 |
| 3.7 转Chs3b和GLS基因小麦材料的筛选与鉴定 | 第49-50页 |
| 3.7.1 基因枪介导的小麦转化和阳性植株的获得 | 第49-50页 |
| 3.7.2 转基因植株T_0代PCR鉴定 | 第50页 |
| 3.8 转Chs7和Pkc、Blf基因小麦材料高世代鉴定 | 第50-55页 |
| 3.8.1 转Pkc、Blf基因植株T_4、T_5代PCR鉴定及大田单花接种鉴定 | 第50-53页 |
| 3.8.2 转Chs7基因植株T_4代PCR鉴定及温室单花接种鉴定 | 第53-55页 |
| 3.9 转UEch42和AFP2基因小麦材料高世代鉴定 | 第55-57页 |
| 3.9.1 转基因植株T_4代PCR鉴定及温室接种鉴定 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 双启动子表达载体 | 第57-58页 |
| 4.2 不同筛选体系的比较 | 第58页 |
| 4.3 转RNAi构建体植株后代分离规律及赤霉病抗性分析 | 第58-59页 |
| 4.4 转基因植株后代表型变化分析 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
