| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 引言 | 第8-14页 |
| ·空肠弯曲菌生物学特征及其致病性 | 第8页 |
| ·空肠弯曲菌鞭毛的结构、合成及其调节 | 第8-10页 |
| ·细菌鞭毛的组成结构 | 第8页 |
| ·细菌鞭毛合成及其调节机制 | 第8-9页 |
| ·空肠弯曲菌鞭毛输出系统 | 第9-10页 |
| ·与空肠弯曲菌致病性相关的表型 | 第10-11页 |
| ·鞭毛介导的运动性与菌体致病性 | 第10页 |
| ·菌体自身凝集性与致病性 | 第10-11页 |
| ·生物膜形成能力与菌体致病性 | 第11页 |
| ·立题背景与意义 | 第11-12页 |
| ·课题研究内容和研究目标 | 第12-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-29页 |
| ·实验材料 | 第14-18页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第14页 |
| ·培养基及用途 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-18页 |
| ·分子生物学基础实验操作 | 第18-22页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第18页 |
| ·质粒的小量提取 | 第18页 |
| ·基因组的提取 | 第18-19页 |
| ·50μl PCR反应体系 | 第19页 |
| ·1%琼脂糖凝胶电泳 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第19-20页 |
| ·质粒或PCR产物的酶切 | 第20页 |
| ·酶切产物或PCR产物的纯化回收 | 第20-21页 |
| ·单酶切后质粒的去磷酸化 | 第21页 |
| ·质粒和PCR产物的连接 | 第21页 |
| ·质粒转化入感受态细胞 | 第21-22页 |
| ·菌种保藏 | 第22页 |
| ·插入失活法构建C.jejuni ATCC33291 flhA突变株 | 第22页 |
| ·敲除载体pMD19-T-flhA-kan~r的构建 | 第22页 |
| ·flhA突变株的构建 | 第22页 |
| ·HXW001毒力相关表型研究 | 第22-23页 |
| ·测定生长曲线 | 第22-23页 |
| ·透射电镜(TEM)观察菌体形态 | 第23页 |
| ·运动能力实验 | 第23页 |
| ·生物膜形成能力 | 第23页 |
| ·自身凝集性 | 第23页 |
| ·荧光定量PCR的方法研究flhA对鞭毛合成的调节功能 | 第23-25页 |
| ·RNA的提取 | 第24页 |
| ·DNA酶降解RNA中的DNA污染 | 第24页 |
| ·cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·荧光定量PCR体系 | 第25页 |
| ·flhA对Ⅲ型毒力蛋白CiaB胞内转录和胞外分泌能力的研究 | 第25-29页 |
| ·flhA对C.jejuni Ⅲ型毒力蛋白CiaB胞内转录水平的影响 | 第25页 |
| ·C.jejuni Ⅲ型毒力蛋白CiaB的制备和浓缩 | 第25页 |
| ·ciaB原核表达系统构建 | 第25-26页 |
| ·CiaB蛋白的诱导表达 | 第26页 |
| ·Ni-NTA树脂纯化CiaB蛋白 | 第26-27页 |
| ·透析袋的预处理 | 第27页 |
| ·纯化后蛋白质浓缩保存 | 第27页 |
| ·NTA树脂的再生 | 第27-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-46页 |
| ·C.jejuni ATCC33291 flhA突变株的构建 | 第29-31页 |
| ·敲除载体构建成功 | 第29-30页 |
| ·C.jejuni ATCC33291 flhA突变株构建成功 | 第30-31页 |
| ·阶段小结 | 第31页 |
| ·HXW001毒力相关表型的研究 | 第31-36页 |
| ·HXW001在液体环境中生长稳定 | 第31-32页 |
| ·HXW001丧失运动能力 | 第32-33页 |
| ·电镜观察HXW001失去鞭毛 | 第33页 |
| ·HXW001生物膜形成能力下降 | 第33-34页 |
| ·HXW001自身凝集现象减弱 | 第34-35页 |
| ·阶段小结 | 第35-36页 |
| ·flhA对鞭毛合成调节功能的初步研究 | 第36-40页 |
| ·荧光定量PCR原理 | 第36-37页 |
| ·flhA对鞭毛合成相关基因的调控功能 | 第37-40页 |
| ·阶段小结 | 第40页 |
| ·flhA对Ⅲ型毒力蛋白CiaB胞内转录和胞外分泌能力的研究 | 第40-46页 |
| ·flhA对ciaB胞内转录水平的影响 | 第41-42页 |
| ·ciaB扩增结果 | 第42页 |
| ·ciaB原核表达系统的构建结果 | 第42-44页 |
| ·CiaB蛋白的表达结果 | 第44-45页 |
| ·CiaB蛋白的纯化结果 | 第45页 |
| ·阶段小结 | 第45-46页 |
| 第四章 结论与展望 | 第46-47页 |
| ·结论 | 第46页 |
| ·展望 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
