| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第15-33页 |
| 1.1 二氧化碳固定 | 第15-23页 |
| 1.1.1 二氧化碳 | 第15页 |
| 1.1.2 固定二氧化碳的传统方法 | 第15-16页 |
| 1.1.3 固定二氧化碳的新兴方法——生物法 | 第16-20页 |
| 1.1.3.1 生物法固定原理与优点 | 第16-17页 |
| 1.1.3.2 生物法固定思路 | 第17-19页 |
| 1.1.3.2 催化可逆反应的脱羧酶 | 第19-20页 |
| 1.1.4 芳香羧酸脱羧酶 | 第20-23页 |
| 1.1.4.1 杂环类芳香羧酸脱羧酶 | 第21页 |
| 1.1.4.2 苯酚类芳香羧酸脱羧酶 | 第21-22页 |
| 1.1.4.3 催化苯酚邻位羧化的酶 | 第22-23页 |
| 1.2 研究苯酚邻位羧化的现状 | 第23-26页 |
| 1.3 蛋白质晶体学 | 第26-31页 |
| 1.3.1 重组蛋白的表达与纯化 | 第26-29页 |
| 1.3.1.1 大肠杆菌表达系统 | 第26-27页 |
| 1.3.1.2 亲和层析与凝胶层析 | 第27-29页 |
| 1.3.2 蛋白质结晶原理 | 第29-30页 |
| 1.3.3 X-Ray衍射原理 | 第30-31页 |
| 1.4 研究思路 | 第31-33页 |
| 第二章 AODHBD和TMSAD克隆的构建 | 第33-47页 |
| 2.1 主要仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 主要试剂 | 第34-37页 |
| 2.2.1 菌种 | 第34页 |
| 2.2.2 载体 | 第34页 |
| 2.2.3 感受态细胞 | 第34-35页 |
| 2.2.4 常用培养基 | 第35-36页 |
| 2.2.5 常用储液 | 第36-37页 |
| 2.3 AoDHBD和TmSAD克隆的构建 | 第37-47页 |
| 2.3.1 PCR扩增目的基因 | 第37-39页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第39页 |
| 2.3.3 凝胶回收 | 第39-40页 |
| 2.3.4 目的基因与载体的双酶切 | 第40-41页 |
| 2.3.5 连接 | 第41-42页 |
| 2.3.6 转化 | 第42页 |
| 2.3.7 菌落PCR | 第42-44页 |
| 2.3.8 质粒DNA抽提 | 第44-45页 |
| 2.3.9 质粒PCR | 第45-47页 |
| 第三章 AODHBD和TMSAD的纯化 | 第47-57页 |
| 3.1 目的蛋白表达和纯化方法 | 第47-53页 |
| 3.1.1 目的蛋白小量试表达 | 第47-48页 |
| 3.1.2 目的蛋白的大量表达和纯化 | 第48-51页 |
| 3.1.3 亲和层析柱的处理 | 第51-52页 |
| 3.1.4 蛋白纯化缓冲液 | 第52-53页 |
| 3.1.5 SDS-PAGE的相关配方 | 第53页 |
| 3.2 AoDHBD和TmSAD的表达与纯化 | 第53-57页 |
| 3.2.1 AoDHBD和TmSAD的试表达 | 第53-54页 |
| 3.2.2 AoDHBD和TmSAD的大量表达 | 第54-55页 |
| 3.2.3 AoDHBD和TmSAD的凝胶过滤层析 | 第55-57页 |
| 第四章 AODHBD和TMSAD晶体筛选 | 第57-67页 |
| 4.1 晶体条件筛选方法 | 第57-59页 |
| 4.2 AoDHBD晶体条件筛选 | 第59-61页 |
| 4.2.1 AoDHBD晶体筛选与优化 | 第59-61页 |
| 4.2.1.1 AoDHBD晶体初筛 | 第59-61页 |
| 4.2.1.2 AoDHBD晶体重复 | 第61页 |
| 4.3 TmSAD晶体筛选 | 第61-63页 |
| 4.3.1 TmSAD晶体初筛 | 第61-63页 |
| 4.3.2 TmSAD晶体重复 | 第63页 |
| 4.4 AoDHBD添加小分子晶体筛选 | 第63-67页 |
| 第五章 AODHBD/TMSAD晶体结构解析与分析 | 第67-77页 |
| 5.1 AoDHBD/TmSAD晶体结构解析 | 第67-71页 |
| 5.1.1 防冻液的配制 | 第67页 |
| 5.1.2 晶体衍射能力检测实验 | 第67-68页 |
| 5.1.3 AoDHBD和TmSAD的结构解析 | 第68-71页 |
| 5.2 AoDHBD/TmSAD晶体结构分析 | 第71-77页 |
| 5.2.1 AoDHBD/TmSAD晶体结构 | 第71-72页 |
| 5.2.2 AoDHBD/TmSAD同源序列比对 | 第72-74页 |
| 5.2.3 活性位点猜想 | 第74-76页 |
| 5.2.4 设计初步酶活实验 | 第76-77页 |
| 第六章 结果与展望 | 第77-79页 |
| 6.1 研究结果 | 第77页 |
| 6.2 展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 附录1 | 第85-86页 |
| 附录2 | 第86-87页 |
| 附录3 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第91-93页 |
| 作者与导师简介 | 第93-95页 |
| 附件 | 第95-96页 |