| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第14-29页 |
| 一、狂犬病 | 第14-18页 |
| (一) 狂犬病和狂犬病毒简介 | 第14-16页 |
| (二) 狂犬病的传播和国内外疫情概述 | 第16-17页 |
| (三) 狂犬病的暴露后预防 | 第17-18页 |
| 二、抗体 | 第18-23页 |
| (一) 抗体概述 | 第18-20页 |
| (二) 抗体研究的进展 | 第20页 |
| (三) 基因工程抗体简介 | 第20-23页 |
| 三、抗狂犬病毒抗体研究进展 | 第23-24页 |
| 四、基因工程抗体的纯化和复性技术 | 第24-27页 |
| (一) 基因工程抗体的纯化技术 | 第24-26页 |
| (二) 基因工程抗体的复性技术 | 第26-27页 |
| 五、论文设计 | 第27-29页 |
| (一) 论文目的 | 第27页 |
| (二) 实验设计 | 第27-29页 |
| 第二章 抗狂犬病毒G蛋白单链抗体的筛选 | 第29-45页 |
| 一、材料、试剂和仪器 | 第29-32页 |
| (一) 实验动物 | 第29页 |
| (二) 细胞和病毒 | 第29页 |
| (三) 质粒和菌株 | 第29页 |
| (四) 常用酶及试剂盒 | 第29-30页 |
| (五) 主要材料和试剂 | 第30页 |
| (六) 主要仪器与设备 | 第30-31页 |
| (七) 主要缓冲液 | 第31-32页 |
| 二、实验方法 | 第32-36页 |
| (一) scFv98R和scFv98RN基因的合成 | 第33页 |
| (二) scFv98R和scFv98RN表达质粒的构建及筛选 | 第33-34页 |
| (三) scFv98R和scFv98RN的表达 | 第34页 |
| (四) scFv98R和scFv98RN的超声破碎与洗涤 | 第34-35页 |
| (五) scFv98R和scFv98RN的分离纯化 | 第35页 |
| (六) scFv98R和scFv98RN的透析复性 | 第35页 |
| (七) 复性后scFv98R和scFv98RN单体的分离 | 第35-36页 |
| (八) scFv98H、scFv98N、scFv98R、scFv98RN的细胞水平上的中和活性 | 第36页 |
| (九) scFv98H、scFv98N、scFv98R、scFv98RN动物水平上的保护率 | 第36页 |
| 三、实验结果与讨论 | 第36-43页 |
| (一) scFv98R和scFv98RN基因的合成和表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| (二) scFv98R和scFv98RN的诱导表达 | 第38-39页 |
| (三) scFv98R和scFv98RN的纯化和透析复性 | 第39-40页 |
| (四) scFv98R和scFv98RN单体的分离 | 第40-41页 |
| (五) scFv98H、scFv98N、scFv98R、scFv98RN的细胞水平上的中和活性 | 第41-42页 |
| (六) scFv98H、scFv98N、scFv98R、scFv98RN动物水平上的保护率 | 第42-43页 |
| 四、小结 | 第43-45页 |
| 第三章 单链抗体scFv98N纯化的工艺研究 | 第45-59页 |
| 一、材料、试剂和仪器 | 第45-46页 |
| (一) 材料和试剂 | 第45页 |
| (二) 主要溶液 | 第45页 |
| (三) 主要仪器 | 第45-46页 |
| 二、实验方法 | 第46-48页 |
| (一) scFv98N的超声破碎与洗涤 | 第46页 |
| (二) scFv98N纯化层析介质的选择 | 第46-47页 |
| (三) Qxl强阴离子交换层析条件优化 | 第47-48页 |
| (四) 复性后目的蛋白的分子筛层析纯化 | 第48页 |
| (五) 细菌内毒素检查(凝胶法-鲎试剂) | 第48页 |
| (六) 外源性DNA残留量测定(荧光染色法) | 第48页 |
| 三、实验结果与讨论 | 第48-58页 |
| (一) scFv98N的超声破碎与洗涤 | 第49-50页 |
| (二) scFv98N纯化层析介质的选择 | 第50-51页 |
| (三) Qxl强阴离子交换层析条件优化 | 第51-57页 |
| (四) 复性后目的蛋白的分子筛层析纯化 | 第57-58页 |
| 四、小结 | 第58-59页 |
| 第四章 单链抗体scFv98N复性的工艺研究 | 第59-71页 |
| 一、材料、试剂和仪器 | 第59页 |
| (一) 材料 | 第59页 |
| (二) 主要溶液 | 第59页 |
| (三) 主要仪器 | 第59页 |
| 二、实验方法 | 第59-63页 |
| (一) scFv98N的柱上复性 | 第60页 |
| (二) scFv98N的透析复性 | 第60-61页 |
| (三) 透析复性条件优化 | 第61-63页 |
| (四) 抗体对狂犬病毒中和活性的研究 | 第63页 |
| 三、实验结果与讨论 | 第63-69页 |
| (一) scFv98N的柱上复性 | 第63-66页 |
| (二) 透析复性条件的优化 | 第66-69页 |
| 四、小结 | 第69-71页 |
| 第五章 scFv98N产品的鉴定分析 | 第71-74页 |
| 一、材料、试剂与仪器 | 第71页 |
| 二、实验方法 | 第71-72页 |
| (一) 产品纯度测定及Western blot分析 | 第71页 |
| (二) 产品分子量测定 | 第71页 |
| (三) 产品中和活性测定 | 第71页 |
| (四) 产品DNA、LPS残留量测定 | 第71-72页 |
| 三、实验结果 | 第72-73页 |
| (一) 产品纯度测定及Western blot分析 | 第72页 |
| (二) 产品分子量测定 | 第72-73页 |
| (三) 产品中和活性测定 | 第73页 |
| (四) 产品DNA、LPS残留量测定 | 第73页 |
| 四、小结 | 第73-74页 |
| 总结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
