| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩写词表 | 第14-15页 |
| 第一部分 α-半乳糖酶Aga2结构研究 | 第15-61页 |
| 第一章 前言 | 第15-29页 |
| 1.1 糖苷酶概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 糖苷酶作用机制 | 第15-16页 |
| 1.1.2 糖苷酶在糖基化合成中的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 α-半乳糖苷酶研究概述 | 第17-22页 |
| 1.2.1 α-半乳糖苷酶的分类 | 第17页 |
| 1.2.2 α-半乳糖苷酶的应用 | 第17-20页 |
| 1.2.3 α-半乳糖苷酶晶体结构研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3 蛋白晶体学研究 | 第22-27页 |
| 1.3.1 蛋白质晶体生长原理 | 第22-23页 |
| 1.3.2 可溶性蛋白质晶体培养方法 | 第23页 |
| 1.3.3 可溶性蛋白晶体生长条件筛选及优化 | 第23-25页 |
| 1.3.4 可溶性蛋白质晶体结构解析方法 | 第25-27页 |
| 1.4 课题研究意义与内容 | 第27-29页 |
| 1.4.1 工作基础 | 第27页 |
| 1.4.2 本论文的研究意义、内容 | 第27-29页 |
| 第二章 α-半乳糖酶Aga2的高效表达、纯化和结晶 | 第29-51页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.3 实验材料及方法 | 第29-38页 |
| 2.3.1 主要试剂和工具酶 | 第29-30页 |
| 2.3.2 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.3.3 菌株、基因、质粒和培养基 | 第30-31页 |
| 2.3.4 Aga2蛋白结构分析预测 | 第31页 |
| 2.3.5 重组Aga2蛋白的原核表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 2.3.6 重组Aga2蛋白的原核表达 | 第33-34页 |
| 2.3.7 重组Aga2蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.8 重组Aga2水解及转糖基活性测定 | 第35-36页 |
| 2.3.9 蛋白质电泳技术 | 第36页 |
| 2.3.10 重组Aga2限制性酶解 | 第36页 |
| 2.3.11 蛋白质转印 | 第36-37页 |
| 2.3.12 蛋白质N-末端氨基酸测序 | 第37页 |
| 2.3.13 硒代重组Aga2、重组Aga2结晶条件普筛 | 第37页 |
| 2.3.14 结晶条件优化 | 第37页 |
| 2.3.15 重组Aga2与底物共结晶 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-49页 |
| 2.4.1 Aga2蛋白分析及片段截取 | 第38-40页 |
| 2.4.2 重组Aga2全长蛋白分离纯化 | 第40-42页 |
| 2.4.3 重组Aga2全长蛋白的酶解及转糖基活性鉴定 | 第42页 |
| 2.4.4 重组Aga2全长蛋白晶体筛选与优化 | 第42-44页 |
| 2.4.5 重组Aga2与底物共结晶 | 第44-45页 |
| 2.4.6 重组Aga2突变体D471A全长蛋白分离纯化 | 第45页 |
| 2.4.7 限制性酶解Aga2研究保守结构 | 第45-47页 |
| 2.4.8 硒代Aga2重组蛋白的纯化及硒代率的计算 | 第47-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-50页 |
| 2.6 本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 Aga2蛋白质晶体结构解析 | 第51-61页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料及方法 | 第51-52页 |
| 3.2.1 衍射数据收集和处理 | 第51页 |
| 3.2.2 相位求解和模型搭建 | 第51页 |
| 3.2.3 结构模型的修正 | 第51-52页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第52-59页 |
| 3.3.1 单波长反常散射法求解相角 | 第52页 |
| 3.3.2 衍射数据的处理及结构精修结果 | 第52页 |
| 3.3.3 Aga2晶体结构解析 | 第52-59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第二部分 八氢番茄红素脱氢酶CrtI_(Ra)结晶体条件研究 | 第61-87页 |
| 第一章 前言 | 第61-73页 |
| 1.1 类胡萝卜素 | 第61-63页 |
| 1.1.1 类胡萝卜素的结构及性质 | 第61页 |
| 1.1.2 类胡萝卜素的功能与应用 | 第61-63页 |
| 1.2 类胡萝卜素合成途径 | 第63页 |
| 1.3 八氢番茄红素脱氢酶CrtI_(Ra)的研究进展 | 第63-64页 |
| 1.3.1 八氢番茄红素脱氢酶的种类及进化关系 | 第63-64页 |
| 1.3.2 八氢番茄红素脱氢酶的结构特征 | 第64页 |
| 1.4 膜蛋白的纯化和结晶方法 | 第64-72页 |
| 1.4.1 膜蛋白重组表达 | 第65页 |
| 1.4.2 去垢剂的性质与分类 | 第65-70页 |
| 1.4.3 膜蛋白纯化中去垢剂的选择 | 第70-71页 |
| 1.4.4 膜蛋白纯化中去垢剂的移除与更换 | 第71-72页 |
| 1.5 本论文课题的研究意义及内容 | 第72-73页 |
| 第二章 八氢番茄红素脱氢酶CrtI_(Ra)的高效表达、纯化与结晶 | 第73-87页 |
| 2.1 引言 | 第73页 |
| 2.2 实验材料及方法 | 第73-77页 |
| 2.2.1 主要试剂及工具酶 | 第73页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第73页 |
| 2.2.3 菌株、基因、质粒和培养基 | 第73-74页 |
| 2.2.4 CrtI_(Ra)蛋白跨膜域预测 | 第74页 |
| 2.2.5 CrtI_(Ra)原核表达载体的构建 | 第74页 |
| 2.2.6 CrtI_(Ra)全长及及截短蛋白表达菌株筛选及蛋白表达 | 第74-75页 |
| 2.2.7 CrtI_(Ra)全长蛋白的纯化 | 第75-76页 |
| 2.2.8 CrtI_(Ra)去垢剂复合物活性测定 | 第76-77页 |
| 2.2.9 CrtI_(Ra)结晶条件筛选 | 第77页 |
| 2.3 实验结果 | 第77-84页 |
| 2.3.1 CrtI_(Ra)全长蛋白的表达菌株筛选 | 第77-78页 |
| 2.3.2 CrtI_(Ra)跨膜域预测和截短破坏跨膜域的蛋白表达 | 第78-79页 |
| 2.3.3 去垢剂增溶、纯化全长CrtI_(Ra)蛋白及活性鉴定 | 第79-83页 |
| 2.3.4 去垢剂置换及对CrtI_(Ra)蛋白活性状态的影响 | 第83页 |
| 2.3.5 CrtI_(Ra)结晶初筛 | 第83-84页 |
| 2.4 讨论 | 第84-86页 |
| 2.5 本章小结 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第95页 |
