| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 毕赤酵母表达系统 | 第8-10页 |
| 1.1.1 毕赤酵母表达系统的发展 | 第8页 |
| 1.1.2 毕赤酵母表达系统的特点 | 第8-9页 |
| 1.1.3 甲醇代谢与AOX1启动子 | 第9-10页 |
| 1.2 碳源阻遏及甲醇代谢调控 | 第10-12页 |
| 1.2.1 碳源阻遏及甲醇代谢调控机制研究 | 第10-11页 |
| 1.2.2 碳源阻遏对工业生产的影响 | 第11-12页 |
| 1.3 甘油转运体与甲醇代谢 | 第12-13页 |
| 1.3.1 甘油转运体的发现 | 第12-13页 |
| 1.3.2 甘油转运体对甲醇代谢的影响 | 第13页 |
| 1.4 系统生物学与高通量转录组测序 | 第13-16页 |
| 1.4.1 系统生物学与高通量转录组测序 | 第13-15页 |
| 1.4.2 系统水平毕赤酵母研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 课题研究内容 | 第16-18页 |
| 1.5.1 课题来源和意义 | 第16页 |
| 1.5.2 本课题的主要研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 工具酶和分子量标准 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂、耗材及试剂盒 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第20-21页 |
| 2.1.6 主要培养基 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-36页 |
| 2.2.1 甘油转运体缺失型GS115GT1?菌株的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.2 转录组测序样品的制备及测序 | 第24-26页 |
| 2.2.3 基于RNA-Seq技术的转录组分析 | 第26-27页 |
| 2.2.4 甘油及甲醇残量的测定 | 第27页 |
| 2.2.5 醇氧化酶酶活及蛋白含量的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR检测兴趣基因mRNA的表达水平 | 第28-30页 |
| 2.2.7 突变株GS115SUT2?的构建 | 第30-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-58页 |
| 3.1 甘油转运体缺失型菌株的构建 | 第36页 |
| 3.2 转录组数据分析 | 第36-45页 |
| 3.2.1 转录组测序数据概况 | 第36-38页 |
| 3.2.2 高表达基因的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.3 甘油转运体GT1在转录水平对甘油代谢的影响 | 第39-43页 |
| 3.2.4 甘油转运体GT1在转录水平对甲醇代谢的影响 | 第43页 |
| 3.2.5 差异表达的转录因子对代谢的调控 | 第43-45页 |
| 3.3 加权基因共表达网络的构建 | 第45-49页 |
| 3.3.1 培养基中甘油、甲醇残量的测定 | 第45-46页 |
| 3.3.2 醇氧化酶蛋白含量及酶活的测定 | 第46-47页 |
| 3.3.3 加权基因共表达网络WGCNA的构建 | 第47-49页 |
| 3.4 甲醇代谢信号通路的构建 | 第49-51页 |
| 3.4.1 AMPK/SNF1信号通路可促进甲醇代谢 | 第49-50页 |
| 3.4.2 MAPK/HOG信号通路可抑制甲醇代谢 | 第50-51页 |
| 3.5 差异基因的功能验证 | 第51-58页 |
| 3.5.1 差异表达基因的荧光定量PCR验证 | 第51-54页 |
| 3.5.2 固醇吸收蛋白SUT2基因的敲除与初级功能验证 | 第54-58页 |
| 主要结论与展望 | 第58-60页 |
| 主要结论 | 第58页 |
| 展望 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录A:转录组数据分析 | 第67-72页 |
| 1.高表达基因的GenBank索引号及注释 | 第67-69页 |
| 2.甘油转运体GT1对甲醇代谢影响的基因 | 第69-70页 |
| 3.差异表达的转录因子 | 第70-72页 |
| 附录B:转录组分析补充材料 | 第72-73页 |
| 附录C:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第73页 |
