| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一部分 铜绿微囊藻气囊蛋白的结构与功能研究 | 第13-83页 |
| 第一章 铜绿微囊藻气囊蛋白的研究背景 | 第13-37页 |
| 1.1 引言 | 第13-19页 |
| 1.1.1 蓝藻与铜绿微囊藻简介 | 第13-16页 |
| 1.1.2 蓝藻水华概述 | 第16-19页 |
| 1.2 蓝藻的浮力调节机制 | 第19-22页 |
| 1.2.1 蓝藻浮力调节机制的内容 | 第19-21页 |
| 1.2.2 蓝藻浮力调节机制的影响因素 | 第21-22页 |
| 1.3 气囊以及气囊的研究现状 | 第22-37页 |
| 1.3.1 气囊产生的物种多样性 | 第23-25页 |
| 1.3.2 气囊的结构和物理性质 | 第25-28页 |
| 1.3.3 气囊的合成：gvp基因簇和Gvp蛋白 | 第28-33页 |
| 1.3.4 铜绿微囊藻Microcystis aeruginosa PCC 7806的气囊研究 | 第33-34页 |
| 1.3.5 气囊的分子生物学研究探讨 | 第34-37页 |
| 第二章 实验材料、设备与方法 | 第37-49页 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第37页 |
| 2.1.2 酶类及其它试剂 | 第37页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-49页 |
| 2.2.1 目的基因gvpF的克隆与重组质粒的构建 | 第38-40页 |
| 2.2.2 目的蛋白GvpF的超量表达与纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.3 GvpF硒代蛋白的表达与纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.4 目的蛋白GvpF的晶体初筛和优化 | 第42页 |
| 2.2.5 晶体的数据收集、结构解析和精修 | 第42-43页 |
| 2.2.6 铜绿微囊藻的室内培养 | 第43页 |
| 2.2.7 铜绿微囊藻气囊的分离纯化 | 第43-44页 |
| 2.2.8 铜绿微囊藻气囊的电镜观察 | 第44页 |
| 2.2.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹法鉴定目的蛋白 | 第44-45页 |
| 2.2.10 免疫胶体金定位和断层成像技术 | 第45页 |
| 2.2.11 其它gvp基因的克隆、重组质粒的构建和蛋白的表达纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.12 化学交联与动态光散射 | 第46-47页 |
| 2.2.13 其它Gvp蛋白的结晶与晶体优化 | 第47-49页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第49-73页 |
| 3.1 GvpF的序列分析 | 第49页 |
| 3.2 目的蛋白GvpF的表达纯化 | 第49-50页 |
| 3.3 GvpF的晶体学研究 | 第50-53页 |
| 3.3.1 GvpF的晶体初筛和优化 | 第50页 |
| 3.3.2 GvpF的晶体的X射线衍射数据的收集、处理及晶体结构解析 | 第50-52页 |
| 3.3.3 GvpF的结构模型质量评估 | 第52-53页 |
| 3.4 GvpF的结构与结构分析 | 第53-59页 |
| 3.4.1 GvpF的整体结构 | 第53-57页 |
| 3.4.2 GvpF的结构与同源结构的比对 | 第57-59页 |
| 3.5 GvpF是气囊结构蛋白的鉴定 | 第59-60页 |
| 3.6 GvpF在气囊上的定位 | 第60-61页 |
| 3.7 GvpC重组蛋白的表达纯化与结晶 | 第61-64页 |
| 3.7.1 GvpC全长蛋白的变复性纯化与结晶 | 第61-63页 |
| 3.7.2 GvpC截短板蛋白的表达纯化 | 第63-64页 |
| 3.8 GvpW重组蛋白的表达纯化与结晶 | 第64-68页 |
| 3.8.1 GvpW全长蛋白的表达纯化 | 第64-65页 |
| 3.8.2 GvpW全长蛋白的交联与动态光散射分析 | 第65-66页 |
| 3.8.3 GvpW全长蛋白的晶体初筛和优化 | 第66-67页 |
| 3.8.4 GvpW全长蛋白的部分酶解和截短版蛋白的构建 | 第67-68页 |
| 3.9 GvpN重组蛋白的表达纯化与酶活的初步验证 | 第68-70页 |
| 3.10 其它Gvp重组蛋白的表达纯化 | 第70-71页 |
| 3.11 本篇小结 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 第二部分 参与合作的其它工作 | 第83-109页 |
| 第四章 铜绿微囊藻CysK1和CysK2的晶体结构研究 | 第83-99页 |
| 4.1 引言 | 第83-84页 |
| 4.1.1 O-乙酰丝氨酸巯解酶(OASS)的背景简述 | 第83-84页 |
| 4.2 实验材料、仪器设备与方法 | 第84-86页 |
| 4.2.1 实验材料与仪器设备 | 第84页 |
| 4.2.2 重组质粒的构建 | 第84页 |
| 4.2.3 目的蛋白的表达与纯化 | 第84页 |
| 4.2.4 蛋白晶体的初筛与优化 | 第84-85页 |
| 4.2.5 蛋白晶体的X射线衍射数据的收集、处理及结构解析 | 第85页 |
| 4.2.6 底物/产物结合常数的测定 | 第85页 |
| 4.2.7 酶活性和抑制实验的测定 | 第85-86页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第86-94页 |
| 4.3.1 CysK1和CysK2的表达与纯化 | 第86-88页 |
| 4.3.2 CysK1和CysK2的晶体学研究 | 第88-90页 |
| 4.3.3 CysK1和CysK2的晶体结构 | 第90-94页 |
| 4.4 本章小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-99页 |
| 第五章 鱼腥藻异形胞分化相关蛋白的晶体结构研究 | 第99-109页 |
| 5.1 氮代谢调控蛋白P_Ⅱ与PipX的晶体结构研究 | 第99-101页 |
| 5.1.1 P_Ⅱ与PipX的研究背景 | 第99页 |
| 5.1.2 结果与讨论 | 第99-101页 |
| 5.2 异形胞分化转录调控蛋白HetZ的晶体结构研究 | 第101-104页 |
| 5.2.1 HetZ的研究发现 | 第101-102页 |
| 5.2.2 结果与讨论 | 第102-104页 |
| 5.3 异形胞多糖层合成必需蛋白Alr2831的晶体结构研究 | 第104-107页 |
| 5.3.1 Alr2831的研究背景 | 第104-105页 |
| 5.3.2 结果与讨论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-109页 |
| 附录 | 第109-125页 |
| A：pET28b(+),pET29b(+)、pET-MBP和pET-Sumo载体图谱 | 第109-111页 |
| B：实验仪器、酶类和试剂 | 第111-112页 |
| C：PCR反应体系及过程 | 第112-113页 |
| D：酶切、连接和转化 | 第113-115页 |
| E：PCR产物的回收 | 第115页 |
| F：质粒抽提 | 第115-116页 |
| G：大肠杆菌感受态的制备 | 第116页 |
| H：琼脂糖凝胶电泳的实验流程 | 第116-117页 |
| I：聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的实验流程 | 第117-118页 |
| J：蛋白质纯化原理和步骤 | 第118-120页 |
| K：蛋白质结晶的原理和方法 | 第120-122页 |
| L：培养基配方 | 第122-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第127页 |
