| CONTENTS | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 病原概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 猪流行性腹泻病毒 | 第12-14页 |
| 1.1.2 猪传染性胃肠炎病毒 | 第14-15页 |
| 1.1.3 猪轮状病毒 | 第15-16页 |
| 1.2 PEDV、TGEV、PoRV的诊断方法 | 第16-21页 |
| 1.2.1 临床诊断 | 第16-17页 |
| 1.2.2 实验室诊断 | 第17-21页 |
| 1.3 实时荧光定量PCR技术 | 第21-23页 |
| 1.3.1 原理 | 第22页 |
| 1.3.2 分类 | 第22页 |
| 1.3.3 应用 | 第22-23页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 病毒及临床样品 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.1.4 病料样品的处理 | 第25页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 单一病原体基因PCR扩增及测序 | 第26-27页 |
| 2.2.2 多重RT-PCR扩增 | 第27页 |
| 2.2.3 PCR产物的回收 | 第27-28页 |
| 2.2.4 目的基因片段与pMD18-T载体的连接 | 第28页 |
| 2.2.5 大肠杆菌JM-109感受态的制备 | 第28页 |
| 2.2.6 连接产物的转化 | 第28页 |
| 2.2.7 pMD18-T基因重组质粒的鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.8 测序及结果分析 | 第30页 |
| 2.2.9 多重PCR扩增条件的优化 | 第30页 |
| 2.2.10 特异性试验 | 第30页 |
| 2.2.11 敏感性试验 | 第30页 |
| 2.2.12 重复性试验 | 第30页 |
| 2.2.13 临床感染病料的检测 | 第30页 |
| 2.2.14 荧光定量PCR标准品的制备及标准曲线的建立 | 第30-31页 |
| 2.2.15 荧光定量PCR的特异性 | 第31页 |
| 2.2.16 荧光定量PCR的重复性 | 第31-32页 |
| 2.2.17 荧光定量PCR的敏感性 | 第32页 |
| 2.2.18 荧光定量PCR临床样品检测 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-46页 |
| 3.1 多重PCR扩增条件的优化结果 | 第33-35页 |
| 3.1.1 单一RT-PCR扩增及退火温度的优化结果 | 第33-34页 |
| 3.1.2 多重RT-PCR引物浓度的优化结果 | 第34页 |
| 3.1.3 多重RT-PCR循环数的优化结果 | 第34-35页 |
| 3.2 特异性试验结果 | 第35-36页 |
| 3.3 敏感性试验结果 | 第36页 |
| 3.4 重复性试验结果 | 第36页 |
| 3.5 临床样品的检测 | 第36-37页 |
| 3.6 荧光定量PCR扩增目的片段电泳结果 | 第37-38页 |
| 3.7 重组质粒测序结果 | 第38页 |
| 3.8 荧光定量PCR标准曲线 | 第38-42页 |
| 3.9 荧光定量PCR重复性试验结果 | 第42-43页 |
| 3.10 荧光定量PCR溶解曲线分析结果 | 第43-44页 |
| 3.11 荧光定量PCR特异性试验结果 | 第44页 |
| 3.12 荧光定量PCR临床样品检测结果 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 4.1 多重RT-PCR方法检测猪腹泻病毒 | 第46页 |
| 4.2 检测猪腹泻病毒的荧光定量PCR方法分析 | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 5.1 建立了检测PEDV、TGEV、PoRV的多重PCR方法 | 第48页 |
| 5.2 建立了检测PEDV、TGEV、PoRV荧光定量PCR方法 | 第48页 |
| 5.3 临床样品的检测 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
