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炎症小体在自身免疫甲状腺炎发病机制中的作用及机制研究

摘要第4-7页
Abstract第7-10页
英文缩略语第11-18页
第一部分 NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2炎症小体在自身免疫甲状腺炎患者甲状腺组织及外周血单个核细胞中的表达变化第18-43页
    1 前言第18-20页
    2 材料和方法第20-30页
        2.1 主要试剂及仪器第20-23页
            2.1.1 主要试剂第20-22页
            2.1.2 主要仪器及耗材第22-23页
        2.2 研究对象及标本采集第23-24页
        2.3 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞第24页
        2.4 苏木精-伊红染色法第24页
        2.5 RNA提取及Real-timePCR第24-26页
            2.5.1 RNA提取(PBMCRNA提取省去匀浆步骤)第24-25页
            2.5.2 反转录第25页
            2.5.3 Real-timePCR第25-26页
        2.6 蛋白提取及Western-Blot第26-27页
            2.6.1 蛋白提取(PBMC蛋白提取省去匀浆步骤)第26-27页
            2.6.2 蛋白定量(BCA法)第27页
            2.6.3 免疫印记(Western-Blot)第27页
        2.7 石蜡切片免疫组化染色第27-29页
            2.7.1 甲状腺组织石蜡包埋、切片第28页
            2.7.2 甲状腺组织石蜡切片免疫组化染色第28-29页
        2.8 酶联免疫吸附测定(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)第29页
        2.9 统计分析第29-30页
    3 结果第30-40页
        3.1 NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2炎症小体及其下游细胞因子(IL-18和IL-1β)在AIT患者甲状腺组织中表达水平升高第30-36页
            3.1.1 研究对象一般情况第30页
            3.1.2 甲状腺组织H&E染色第30-31页
            3.1.3 AIT组甲状腺组织NLRP1,NLRP3,NLRC4,AIM2炎症小体表达增高第31-32页
            3.1.4 AIT组甲状腺组织炎症小体相关细胞因子(IL-1β和IL-18)表达升高、活化增加第32-33页
            3.1.5 甲状腺组织NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2表达定位第33-34页
            3.1.6 甲状腺组织中炎症小体及其下游细胞因子(IL-18、IL-1β)mRNA表达水平与血清TPOAb/TgAb的相关性分析第34-36页
        3.2 NLRP3、NLRC4、Caspase-1p20及IL-18、IL-1β在AIT患者PBMC中表达水平升高第36-40页
            3.2.1 患者一般资料统计第36页
            3.2.2 NLRP3、NLRC4、Caspase-1p20在AIT患者PBMC中表达水平升高第36-37页
            3.2.3 PBMC中炎症小体相关细胞因子(IL-1β和IL-18)的表达和活化第37-38页
            3.2.4 AIT组及对照组血清IL-1β和IL-18水平第38-39页
            3.2.5 PBMC中炎症小体相关指标及其下游细胞因子(IL-18、IL-1β)mRNA表达水平与血清TPOAb/TgAb的相关性分析第39-40页
    4 讨论第40-42页
    5 结论第42-43页
第二部分 甲状腺细胞内的炎症小体通过介导细胞焦亡和促进活性细胞因子释放参与AIT发病机制第43-63页
    1 前言第43-45页
    2 材料和方法第45-53页
        2.1 主要试剂及仪器第45-47页
            2.1.1 主要试剂第45-46页
            2.1.2 主要仪器及耗材第46-47页
        2.2 细胞系及体外刺激第47页
        2.3 总RNA提取及Real-timePCR第47-49页
            2.3.1 RNA提取第47-48页
            2.3.2 反转录第48页
            2.3.3 Real-timePCR第48-49页
        2.4 总蛋白提取及Western-Blot第49-50页
            2.4.1 蛋白提取第49页
            2.4.2 蛋白定量(BCA法)第49-50页
            2.4.3 免疫印记(Western-Blot)第50页
        2.5 酶联免疫吸附测定(ELISA)第50-51页
        2.6 免疫荧光(Immunofluorescence)第51-52页
        2.7 Annexin-V-PI染色、流式细胞术(FlowCytometry)第52页
        2.8 细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)测定第52-53页
        2.9 统计分析第53页
    3 结果第53-60页
        3.1 细胞因子促进甲状腺细胞内炎症小体的表达第53-56页
            3.1.1 Nthy-roi3-1甲状腺细胞系表达NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2蛋白分子第53页
            3.1.2 IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-17A对甲状腺细胞炎症小体表达水平的影响第53-55页
            3.1.3 IFN-γ、TNF-α对甲状腺细胞细胞因子分泌的影响第55-56页
        3.2 甲状腺细胞内AIM2炎症小体促进IL-18活化和细胞焦亡第56-60页
            3.2.1 IFN-γ+Poly(dA:dT)共刺激促进甲状腺细胞AIM2炎症小体激活第56页
            3.2.2 IFN-γ+Poly(dA:dT)共刺激促进甲状腺细胞分泌IL-18第56-57页
            3.2.3 IFN-γ+Poly(dA:dT)共刺激促进甲状腺细胞焦亡(Pyroptosis)第57-59页
            3.2.4 抑制炎症小体形成减少甲状腺细胞焦亡和IL-18释放第59-60页
    4 讨论第60-61页
    5 结论第61-63页
本研究创新性的自我评价第63-64页
参考文献第64-70页
综述第70-85页
    参考文献第79-85页
攻读学位期间取得的研究成果第85-86页
致谢第86-87页
个人简历第87页

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