| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-18页 |
| 第一部分 NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2炎症小体在自身免疫甲状腺炎患者甲状腺组织及外周血单个核细胞中的表达变化 | 第18-43页 |
| 1 前言 | 第18-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-30页 |
| 2.1 主要试剂及仪器 | 第20-23页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.2 主要仪器及耗材 | 第22-23页 |
| 2.2 研究对象及标本采集 | 第23-24页 |
| 2.3 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 | 第24页 |
| 2.4 苏木精-伊红染色法 | 第24页 |
| 2.5 RNA提取及Real-timePCR | 第24-26页 |
| 2.5.1 RNA提取(PBMCRNA提取省去匀浆步骤) | 第24-25页 |
| 2.5.2 反转录 | 第25页 |
| 2.5.3 Real-timePCR | 第25-26页 |
| 2.6 蛋白提取及Western-Blot | 第26-27页 |
| 2.6.1 蛋白提取(PBMC蛋白提取省去匀浆步骤) | 第26-27页 |
| 2.6.2 蛋白定量(BCA法) | 第27页 |
| 2.6.3 免疫印记(Western-Blot) | 第27页 |
| 2.7 石蜡切片免疫组化染色 | 第27-29页 |
| 2.7.1 甲状腺组织石蜡包埋、切片 | 第28页 |
| 2.7.2 甲状腺组织石蜡切片免疫组化染色 | 第28-29页 |
| 2.8 酶联免疫吸附测定(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA) | 第29页 |
| 2.9 统计分析 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-40页 |
| 3.1 NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2炎症小体及其下游细胞因子(IL-18和IL-1β)在AIT患者甲状腺组织中表达水平升高 | 第30-36页 |
| 3.1.1 研究对象一般情况 | 第30页 |
| 3.1.2 甲状腺组织H&E染色 | 第30-31页 |
| 3.1.3 AIT组甲状腺组织NLRP1,NLRP3,NLRC4,AIM2炎症小体表达增高 | 第31-32页 |
| 3.1.4 AIT组甲状腺组织炎症小体相关细胞因子(IL-1β和IL-18)表达升高、活化增加 | 第32-33页 |
| 3.1.5 甲状腺组织NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2表达定位 | 第33-34页 |
| 3.1.6 甲状腺组织中炎症小体及其下游细胞因子(IL-18、IL-1β)mRNA表达水平与血清TPOAb/TgAb的相关性分析 | 第34-36页 |
| 3.2 NLRP3、NLRC4、Caspase-1p20及IL-18、IL-1β在AIT患者PBMC中表达水平升高 | 第36-40页 |
| 3.2.1 患者一般资料统计 | 第36页 |
| 3.2.2 NLRP3、NLRC4、Caspase-1p20在AIT患者PBMC中表达水平升高 | 第36-37页 |
| 3.2.3 PBMC中炎症小体相关细胞因子(IL-1β和IL-18)的表达和活化 | 第37-38页 |
| 3.2.4 AIT组及对照组血清IL-1β和IL-18水平 | 第38-39页 |
| 3.2.5 PBMC中炎症小体相关指标及其下游细胞因子(IL-18、IL-1β)mRNA表达水平与血清TPOAb/TgAb的相关性分析 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 第二部分 甲状腺细胞内的炎症小体通过介导细胞焦亡和促进活性细胞因子释放参与AIT发病机制 | 第43-63页 |
| 1 前言 | 第43-45页 |
| 2 材料和方法 | 第45-53页 |
| 2.1 主要试剂及仪器 | 第45-47页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第45-46页 |
| 2.1.2 主要仪器及耗材 | 第46-47页 |
| 2.2 细胞系及体外刺激 | 第47页 |
| 2.3 总RNA提取及Real-timePCR | 第47-49页 |
| 2.3.1 RNA提取 | 第47-48页 |
| 2.3.2 反转录 | 第48页 |
| 2.3.3 Real-timePCR | 第48-49页 |
| 2.4 总蛋白提取及Western-Blot | 第49-50页 |
| 2.4.1 蛋白提取 | 第49页 |
| 2.4.2 蛋白定量(BCA法) | 第49-50页 |
| 2.4.3 免疫印记(Western-Blot) | 第50页 |
| 2.5 酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第50-51页 |
| 2.6 免疫荧光(Immunofluorescence) | 第51-52页 |
| 2.7 Annexin-V-PI染色、流式细胞术(FlowCytometry) | 第52页 |
| 2.8 细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)测定 | 第52-53页 |
| 2.9 统计分析 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-60页 |
| 3.1 细胞因子促进甲状腺细胞内炎症小体的表达 | 第53-56页 |
| 3.1.1 Nthy-roi3-1甲状腺细胞系表达NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2蛋白分子 | 第53页 |
| 3.1.2 IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-17A对甲状腺细胞炎症小体表达水平的影响 | 第53-55页 |
| 3.1.3 IFN-γ、TNF-α对甲状腺细胞细胞因子分泌的影响 | 第55-56页 |
| 3.2 甲状腺细胞内AIM2炎症小体促进IL-18活化和细胞焦亡 | 第56-60页 |
| 3.2.1 IFN-γ+Poly(dA:dT)共刺激促进甲状腺细胞AIM2炎症小体激活 | 第56页 |
| 3.2.2 IFN-γ+Poly(dA:dT)共刺激促进甲状腺细胞分泌IL-18 | 第56-57页 |
| 3.2.3 IFN-γ+Poly(dA:dT)共刺激促进甲状腺细胞焦亡(Pyroptosis) | 第57-59页 |
| 3.2.4 抑制炎症小体形成减少甲状腺细胞焦亡和IL-18释放 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 5 结论 | 第61-63页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 综述 | 第70-85页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 个人简历 | 第87页 |
