| 符号说明 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 1.引言 | 第17-45页 |
| 1.1 植物的抗病机制研究进展 | 第18-27页 |
| 1.1.1 植物的抗病机制 | 第18-20页 |
| 1.1.2 植物抗病基因和无毒基因 | 第20-24页 |
| 1.1.3 “基因对基因”假说 | 第24-27页 |
| 1.2 植物非寄主抗性研究进展 | 第27-36页 |
| 1.2.1 植物非寄主抗性 | 第27-28页 |
| 1.2.2 非寄主抗性的类型 | 第28-30页 |
| 1.2.3 非寄主抗性的分子机制 | 第30-33页 |
| 1.2.4 植物非寄主抗性与“基因对基因”抗性的关系 | 第33-34页 |
| 1.2.5 非寄主抗性基因Rxo1与无毒基因avrRxo | 第34-35页 |
| 1.2.6 非寄主抗性在植物抗病性研究中的应用 | 第35-36页 |
| 1.3 小麦抗病基因工程研究进展 | 第36-40页 |
| 1.3.1 小麦转基因技术的建立 | 第36-37页 |
| 1.3.2 用于小麦抗病基因工程的外源基因 | 第37-40页 |
| 1.4 原生质体制备技术及其在植物病原真菌遗传转化研究中的应用 | 第40-44页 |
| 1.4.1 原生质体的制备与再生技术 | 第40-42页 |
| 1.4.2 原生质体在植物病原真菌遗传转化研究中的应用 | 第42-44页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第44-45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-67页 |
| 2.1 材料 | 第45-47页 |
| 2.1.1 供试植物 | 第45页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第45页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第45页 |
| 2.1.4 仪器 | 第45-46页 |
| 2.1.5 寡聚核苷酸引物 | 第46页 |
| 2.1.6 培养基配制 | 第46页 |
| 2.1.7 原生质体渗透压稳定剂 | 第46-47页 |
| 2.2 表达载体的构建 | 第47-52页 |
| 2.2.1 利用农杆菌介导的烟草瞬时表达系统对病原诱导型启动子功能的鉴定 | 第47页 |
| 2.2.2 质粒的提取 | 第47-48页 |
| 2.2.3 高保真PCR扩增 | 第48页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第48-49页 |
| 2.2.5 目的片段切胶回收 | 第49页 |
| 2.2.6 目的DNA片段的TA克隆和测序 | 第49-50页 |
| 2.2.7 Over-lappingPCR | 第50页 |
| 2.2.8 表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 2.3 基因枪法介导的小麦幼胚转化 | 第52-54页 |
| 2.3.1 小麦幼胚的取材 | 第52-53页 |
| 2.3.2 基因枪法转化 | 第53页 |
| 2.3.3 转化后的恢复、筛选和再生 | 第53页 |
| 2.3.4 基因枪转化所用培养基 | 第53-54页 |
| 2.4 转基因小麦的gDNA水平分子检测 | 第54-57页 |
| 2.4.1 小麦基因组DNA的提取 | 第54-55页 |
| 2.4.2 DNA提取试剂的配制 | 第55-56页 |
| 2.4.3 转基因植株的PCR检测 | 第56-57页 |
| 2.5 转基因植株的cDNA水平检测 | 第57-58页 |
| 2.5.1 小麦总RNA的提取 | 第57-58页 |
| 2.5.2 小麦cDNA第一条链的合成 | 第58页 |
| 2.5.3 qRT-PCR检测 | 第58页 |
| 2.6 T_2代转基因小麦抗病性鉴定 | 第58-59页 |
| 2.6.1 病原菌麦粒种的准备 | 第58页 |
| 2.6.2 温室内土壤接种及转基因小麦致病性测定 | 第58-59页 |
| 2.6.3 小麦根腐病分级标准 | 第59页 |
| 2.6.4 小麦纹枯病分级标准 | 第59页 |
| 2.7 转基因小麦对麦根腐平脐蠕孢抗病机制的探讨 | 第59-64页 |
| 2.7.1 麦根腐平脐蠕孢菌饼接种于小麦叶片 | 第59-60页 |
| 2.7.2 小麦叶片的木质素、酚类物质及胼胝质染色 | 第60页 |
| 2.7.3 过氧化氢和保护酶类的酶活测定 | 第60-62页 |
| 2.7.4 实时荧光定量PCR检测 | 第62-64页 |
| 2.8 禾谷丝核菌原生质体的制备与再生条件研究 | 第64-67页 |
| 2.8.1 禾谷丝核菌菌丝体的收集与原生质体的制备 | 第64-65页 |
| 2.8.2 禾谷丝核菌原生质体的形态和释放方式的观察 | 第65页 |
| 2.8.3 原生质体接种方式 | 第65页 |
| 2.8.4 原生质体再生条件的优化 | 第65-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-90页 |
| 3.1 表达载体的构建和基因枪法介导的小麦转化 | 第67-71页 |
| 3.1.1 诱导型启动子功能的鉴定 | 第67页 |
| 3.1.2 表达载体的构建 | 第67-69页 |
| 3.1.3 表达载体的转化 | 第69-70页 |
| 3.1.4 转基因小麦的获得 | 第70-71页 |
| 3.2 转基因小麦的分子检测 | 第71-73页 |
| 3.2.1 转基因小麦的PCR分子检测 | 第71-72页 |
| 3.2.2 转基因小麦外源基因的表达分析 | 第72-73页 |
| 3.3 T_2代转基因植株对小麦纹枯病和小麦根腐病的抗病性分析 | 第73-75页 |
| 3.4 转基因小麦对麦根腐平脐蠕孢侵染的抗病机制分析 | 第75-84页 |
| 3.4.1 转基因小麦叶片对麦根腐平脐蠕孢侵染的抗病性表型观察 | 第75-76页 |
| 3.4.2 细胞壁木质素、酚类物质及胼胝质染色与观察 | 第76-78页 |
| 3.4.3 过氧化氢含量和保护酶类活性的测定 | 第78-81页 |
| 3.4.4 外源基因和抗病相关基因的表达分析 | 第81-84页 |
| 3.5 小麦纹枯病菌原生质体的制备与再生 | 第84-90页 |
| 3.5.1 禾谷丝核菌原生质体制备条件的确定 | 第84-86页 |
| 3.5.2 禾谷丝核菌R.cerealis原生质体的形成 | 第86-87页 |
| 3.5.3 影响禾谷丝核菌R.cerealis原生质体再生诸因素的分析 | 第87-90页 |
| 4 讨论 | 第90-95页 |
| 4.1 非寄主抗性基因在植物广谱抗病育种工作中的应用 | 第90页 |
| 4.2 “无毒基因-抗病基因”双元件应用策略与植物的广谱抗病性 | 第90-92页 |
| 4.3 活性氧和保护酶系对植物非寄主抗病性的影响 | 第92-93页 |
| 4.4 非寄主抗性基因介导的转基因小麦对真菌病害抗病机制的探讨 | 第93-94页 |
| 4.5 禾谷丝核菌原生质体的制备和再生条件的优化 | 第94-95页 |
| 5 结论 | 第95-97页 |
| 5.1 转化载体的构建和基因枪法介导的小麦转化 | 第95页 |
| 5.2 转基因小麦的分子检测 | 第95页 |
| 5.3 转基因小麦的抗病性分析 | 第95页 |
| 5.4 转基因小麦对麦根腐平脐蠕孢侵染的抗病机制探讨 | 第95页 |
| 5.5 小麦纹枯病菌原生质体的制备与再生条件优化 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 攻读博士期间发表论文情况 | 第119页 |
