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小麦扩展蛋白基因TaEXPA2在镉胁迫耐性中的功能分析

中文摘要第9-11页
Abstract第11-13页
1 前言第14-25页
    1.1 扩展蛋白的发现第14页
    1.2 扩展蛋白的分类及生理结构第14-17页
        1.2.1 扩展蛋白的分类第14-15页
        1.2.2 扩展蛋白的结构第15-17页
    1.3 扩展蛋白的作用机理第17页
    1.4 扩展蛋白对植物生长发育的作用第17-20页
        1.4.1 扩展蛋白与种子萌发第17-18页
        1.4.2 扩展蛋白与叶片的发育第18页
        1.4.3 扩展蛋白与茎、节的伸长第18页
        1.4.4 扩展蛋白与根的生长第18-19页
        1.4.5 扩展蛋白与花的发育第19页
        1.4.6 扩展蛋白与果实的成熟第19-20页
    1.5 扩展蛋白与植物抗逆性第20-22页
        1.5.1 扩展蛋白与干旱胁迫耐性第20页
        1.5.2 扩展蛋白与高温胁迫耐性第20-21页
        1.5.3 扩展蛋白与盐胁迫耐性第21-22页
        1.5.4 扩展蛋白与生物胁迫耐性第22页
    1.6 扩展蛋白的基因表达调控第22-23页
        1.6.1 扩展蛋白的时空特异性表达第22-23页
        1.6.2 植物激素与扩展蛋白基因的表达第23页
    1.7 本研究的目的意义第23-25页
2 材料与方法第25-35页
    2.1 实验材料与处理第25-27页
        2.1.1 植物材料第25页
        2.1.2 小麦的培养和处理第25页
        2.1.3 烟草的培养和处理第25页
        2.1.4 拟南芥的培养和处理第25-26页
        2.1.5 酶及各种生化试剂第26页
        2.1.6 引物第26-27页
    2.2 分子生物学实验方法第27-31页
        2.2.1 转基因烟草和突变体拟南芥的鉴定第27-29页
            2.2.1.1 CTAB法微量法提取基因组DNA第27-28页
            2.2.1.2 转基因烟草和突变体拟南芥的PCR检测第28-29页
        2.2.2 转基因烟草基因表达水平的检测第29-31页
            2.2.2.1 利用TRIZOL试剂盒提取RNA第29-30页
            2.2.2.2 反转录cDNA第一链的合成第30-31页
            2.2.2.3 转基因烟草的荧光定量PCR检测第31页
    2.3 植物生理实验方法第31-34页
        2.3.1 烟草种子萌发率的统计第31页
        2.3.2 叶片叶绿素含量的测定第31页
        2.3.3 光合参数的测定第31-32页
        2.3.4 丙二醛(MDA)和相对电导的测定第32页
        2.3.5 镉离子在根中的动态运输第32页
        2.3.6 镉离子含量的测定第32页
        2.3.7 质膜和液泡膜的提取及纯化第32-33页
        2.3.8 液泡膜和质膜蛋白质含量的测定(Bradford法)第33页
        2.3.9 质膜和液泡膜上ATP酶活性的测定第33页
        2.3.10 DAB和NBT染色检测活性氧积累第33页
        2.3.11 过氧化氢含量及超氧阴离子自由基的的测定第33页
        2.3.12 抗氧化酶活性测定第33页
        2.3.13 叶片相对含水量及渗透势的测定第33页
        2.3.14 游离脯氨酸及可溶性糖含量的测定第33-34页
    2.4 实验数据统计分析第34-35页
3 结果与分析第35-47页
    3.1 小麦TaEXPA2基因表达对Cd胁迫的响应及转基因烟草鉴定第35-36页
    3.2 过表达TaEXPA2提高了转基因烟草幼苗对Cd的耐性第36-37页
    3.3 镉毒害对转基因烟草生长及光合特性的影响第37-38页
    3.4 镉毒害对WT和转基因烟草的伤害第38-40页
    3.5 镉毒害对叶片相对含水量(RWC)、渗透势、脯氨酸和可溶性糖含量的影响第40页
    3.6 转基因烟草幼苗中Cd~(2+)离子流对镉毒害的响应第40-42页
    3.7 转基因烟草中镉的积累和转运对镉毒害的响应第42-43页
    3.8 镉毒害下转基因烟草活性氧的积累和抗氧化能力分析第43-44页
    3.9 过量表达TaEXPA2烟草中胁迫相关基因表达对镉毒害的响应第44-45页
    3.10 拟南芥同源基因突变体atexpa2对镉毒害的耐性第45-47页
4 讨论第47-50页
    4.1 过表达小麦TaEXPA2基因增强转基因烟草对镉的耐性第47页
    4.2 镉转运能力提高和调节基因表达可能是转基因植株镉耐性增强的原因之一第47页
    4.3 抗氧化能力的提高可能是转基因株系镉胁迫耐性增强的另一重要因素第47-48页
    4.4 提高保水能力有助于提高转基因植株对镉毒害的耐受性第48-49页
    4.5 拟南芥同源基因AtEXPA2与小麦TaEXPA2具有相似的Cd胁迫耐性功能第49-50页
5 结论第50-51页
参考文献第51-59页
致谢第59-60页
攻读学位期间发表的论文及成果第60页

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