| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 引言 | 第14-20页 |
| 1.1 脑卒中概况 | 第14页 |
| 1.2 缺血性脑卒中的多环节病理机制 | 第14-15页 |
| 1.3 抗缺血性脑卒中药物研发现状 | 第15-16页 |
| 1.4 表型筛选在药物研发中的优势 | 第16-17页 |
| 1.5 已上市药物和结构新颖多样小分子是药物研发的重要来源 | 第17-18页 |
| 1.6 新技术涌现为高效发现药物靶标带来曙光 | 第18-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-30页 |
| 2.1.1 活性化合物信息 | 第20-21页 |
| 2.1.2 细胞系 | 第21页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.4 主要试剂耗材 | 第21-25页 |
| 2.1.5 化合物配制 | 第25-26页 |
| 2.1.6 试剂配制 | 第26-29页 |
| 2.1.7 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.2.1 SH-SY5Y细胞氧糖剥夺(OGD)损伤模型构建 | 第30页 |
| 2.2.2 SH-SY5Y细胞H2O2损伤模型构建 | 第30-31页 |
| 2.2.3 HT-22细胞谷氨酸损伤模型建立 | 第31页 |
| 2.2.4 细胞内LDH释放量检测 | 第31页 |
| 2.2.5 细胞内ATP(三磷酸腺苷)的检测 | 第31-32页 |
| 2.2.6 流式法检测细胞内活性氧(ROS) | 第32页 |
| 2.2.7 细胞凋亡检测 | 第32-33页 |
| 2.2.8 核蛋白提取 | 第33页 |
| 2.2.9 蛋白质免疫印迹 | 第33-34页 |
| 2.2.10 大鼠MCAO模型 | 第34页 |
| 2.2.11 大鼠脑梗死面积测定 | 第34-35页 |
| 2.2.12 脑组织含水量测定 | 第35页 |
| 2.2.13 神经行为学(mNSS)评分 | 第35-36页 |
| 2.2.14 ELISA检测炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6) | 第36页 |
| 2.2.15 组织化学 | 第36页 |
| 2.2.16 免疫荧光染色(NeuN、GFAP、Iba-1、ZO-1和CD31) | 第36-37页 |
| 2.2.17 Tunel染色 | 第37页 |
| 2.2.18 Evansblue血脑屏障完整性检测 | 第37页 |
| 2.2.19 Rotarod转棒测试运动协调能力 | 第37-38页 |
| 2.2.20 抗体芯片检测 | 第38页 |
| 2.2.21 磷酸化蛋白质组学 | 第38-39页 |
| 2.2.22 Griess法检测亚硝酸盐 | 第39页 |
| 2.2.23 细胞周期检测 | 第39-40页 |
| 2.2.24 探针靶标垂钓 | 第40-41页 |
| 2.2.25 统计方法 | 第41-42页 |
| 第3章 实验结果与讨论 | 第42-100页 |
| 第一部分 环吡酮胺抗脑缺血损伤药效和机制研究 | 第42-84页 |
| 3.1.1 环吡酮胺抗脑缺血损伤作用发现和体内外药效评价 | 第42-52页 |
| 3.1.1.1 采用表型筛选模型发现新型抗脑缺血活性小分子——老药环吡酮胺 | 第42-44页 |
| 3.1.1.2 环吡酮胺在细胞氧糖剥夺和氧化应激模型中量效关系 | 第44-45页 |
| 3.1.1.3 再灌注时单次给予环吡酮胺降低MCAO术后大鼠脑梗死体积并改善脑水肿 | 第45-47页 |
| 3.1.1.4 环吡酮胺改善MCAO术后大鼠神经功能 | 第47页 |
| 3.1.1.5 环吡酮胺减少MCAO术后大鼠脑内神经元缺失 | 第47-49页 |
| 3.1.1.6 连续给予环吡酮胺7天改善MCAO术后大鼠运动功能 | 第49-51页 |
| 3.1.1.7 连续给予环吡酮胺对MCAO术后大鼠存活情况的影响 | 第51-52页 |
| 3.1.2 环吡酮胺对缺血再灌注诱发多重病理环节的干预作用 | 第52-60页 |
| 3.1.2.1 环吡酮胺抑制MCAO诱发的脑内细胞凋亡 | 第52-53页 |
| 3.1.2.2 环吡酮胺抑制MCAO诱发的脑内胶质细胞激活 | 第53-55页 |
| 3.1.2.3 环吡酮胺减少MCAO术后脑内炎性细胞因子的表达 | 第55-56页 |
| 3.1.2.4 环吡酮胺抑制MCAO术后脑内COX-2高表达 | 第56-57页 |
| 3.1.2.5 环吡酮胺保护MCAO大鼠血脑屏障的完整性 | 第57-58页 |
| 3.1.2.6 环吡酮胺对血管内皮细胞紧密连接蛋白表达的影响 | 第58-60页 |
| 3.1.3 环吡酮胺药理机制研究 | 第60-76页 |
| 3.1.3.1 环吡酮胺上调OGD处理后细胞内HIF-1α表达 | 第60-61页 |
| 3.1.3.2 外源性铁剂对环吡酮胺上调细胞内HIF-1α及其保护作用的影响 | 第61-63页 |
| 3.1.3.3 环吡酮胺对细胞内蛋白磷酸化水平的影响 | 第63-65页 |
| 3.1.3.4 环吡酮胺对OGD处理后细胞内AKT,GSK-3β,mTOR,以及p70S6K磷酸化水平的影响 | 第65-66页 |
| 3.1.3.5 磷酸化蛋白质组学实验流程及数据整理 | 第66-68页 |
| 3.1.3.6 差异磷酸化蛋白的GO分析 | 第68-69页 |
| 3.1.3.7 差异磷酸化蛋白KEGG信号通路富集分析 | 第69-70页 |
| 3.1.3.8 差异磷酸化蛋白富集在调控细胞周期信号通路 | 第70-71页 |
| 3.1.3.9 环吡酮胺对LPS激活BV-2细胞周期的影响 | 第71-73页 |
| 3.1.3.10 连接生物素对环吡酮细胞保护作用的影响 | 第73-74页 |
| 3.1.3.11 阳性探针和阴性探针分子在细胞OGD模型上的药效比较 | 第74-75页 |
| 3.1.3.12 阳性探针分子和阴性探针分子的差异结合蛋白 | 第75-76页 |
| 3.1.4 讨论 | 第76-82页 |
| 3.1.5 小结 | 第82-84页 |
| 第二部分 二芳基酰腙类衍生物A11抗脑缺血损伤药效和机制研究 | 第84-100页 |
| 3.2.1 A11在脑缺血损伤的体内外模型中药效评价 | 第84-89页 |
| 3.2.1.1 二芳基酰腙类衍生物抗缺血损伤活性的发现 | 第84-86页 |
| 3.2.1.2 A11保护SH-SY5Y细胞免受OGD损伤 | 第86-87页 |
| 3.2.1.3 A11减少MCAO术后大鼠脑梗死体积并改善神经功能 | 第87-89页 |
| 3.2.2 A11对脑缺血损伤多重病理环节的干预作用 | 第89-93页 |
| 3.2.2.1 A11减轻氧化应激诱导的神经细胞死亡 | 第89-90页 |
| 3.2.2.2 A11抑制OGD诱导的细胞凋亡 | 第90-92页 |
| 3.2.2.3 A11减轻OGD诱导的线粒体功能障碍 | 第92-93页 |
| 3.2.3 A11保护作用机制研究 | 第93-96页 |
| 3.2.3.1 OGD损伤后不同时间点细胞内AKT和ERK磷酸化水平变化情况 | 第93页 |
| 3.2.3.2 A11抑制OGD诱导的细胞内ERK磷酸化水平的下调并上调AKT磷酸化水平 | 第93-94页 |
| 3.2.3.3 A11通过激活MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路发挥保护作用 | 第94-96页 |
| 3.2.4 讨论 | 第96-98页 |
| 3.2.5 小结 | 第98-100页 |
| 第4章 结论 | 第100-102页 |
| 4.1 环吡酮胺的抗脑缺血药理药效 | 第100页 |
| 4.2 二芳基酰腙类衍生物A11抗脑缺血药理药效 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-114页 |
| 附录 缩略词表 | 第114-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 作者简历及攻读学位期间的学术论文与研究成果 | 第120页 |
