| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-33页 |
| 1.1 植物芽再生的调控机理 | 第15-23页 |
| 1.1.1 植物愈伤组织的形成 | 第15-16页 |
| 1.1.2 细胞分裂素调控芽的再生 | 第16-18页 |
| 1.1.3 生长素调控芽的再生 | 第18-19页 |
| 1.1.4 生长素和细胞分裂素相互作用调控芽的再生 | 第19-20页 |
| 1.1.5 分生组织关键因子调控芽的再生 | 第20-22页 |
| 1.1.6 其它因子调控芽的再生 | 第22-23页 |
| 1.2 植物活性氧 | 第23-26页 |
| 1.2.1 活性氧的产生 | 第23-24页 |
| 1.2.2 活性氧的清除 | 第24页 |
| 1.2.3 活性氧调控植物的生长发育 | 第24-26页 |
| 1.3 植物硫氧还蛋白 | 第26-29页 |
| 1.3.1 植物硫氧还蛋白的分类 | 第26-27页 |
| 1.3.2 植物硫氧还蛋白的结构与功能 | 第27-28页 |
| 1.3.3 植物硫氧还蛋白与活性氧的关系 | 第28页 |
| 1.3.4 硫氧还蛋白调控植物的生长发育 | 第28-29页 |
| 1.4 植物线粒体呼吸链复合体Ⅰ | 第29-31页 |
| 1.4.1 植物线粒体呼吸链复合体Ⅰ结构与功能 | 第29-30页 |
| 1.4.2 植物线粒体呼吸链复合体Ⅰ在植物发育中的作用 | 第30-31页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第33页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第33页 |
| 2.1.3 生化试剂 | 第33页 |
| 2.1.4 培养基 | 第33-34页 |
| 2.1.5 引物 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-52页 |
| 2.2.1 拟南芥芽再生培养 | 第34-35页 |
| 2.2.2 基因组DNA的提取 | 第35页 |
| 2.2.3 载体构建 | 第35-39页 |
| 2.2.3.1 基因扩增 | 第35-36页 |
| 2.2.3.2 DNA琼脂糖凝胶回收 | 第36-37页 |
| 2.2.3.3 连接 | 第37页 |
| 2.2.3.4 TOP 10大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.3.5 转化 | 第38页 |
| 2.2.3.6 质粒DNA的提取 | 第38页 |
| 2.2.3.7 酶切回收 | 第38-39页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第39-40页 |
| 2.2.4.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 2.2.4.2 农杆菌感受态细胞的转化 | 第39页 |
| 2.2.4.3 拟南芥的遗传转化 | 第39-40页 |
| 2.2.4.4 转基因植株的筛选 | 第40页 |
| 2.2.5 基因表达水平的检测 | 第40-42页 |
| 2.2.5.1 RNA的提取 | 第40页 |
| 2.2.5.2 RNA的反转录 | 第40-41页 |
| 2.2.5.3 实时定量PCR引物设计 | 第41页 |
| 2.2.5.4 实时定量PCR反应条件 | 第41-42页 |
| 2.2.6 活性氧染色 | 第42-43页 |
| 2.2.6.1 DAB染色 | 第42页 |
| 2.2.6.2 NBT染色 | 第42-43页 |
| 2.2.7 GUS染色 | 第43页 |
| 2.2.8 石蜡切片的制备和观察 | 第43-44页 |
| 2.2.8.1 取材固定 | 第43页 |
| 2.2.8.2 脱水与浸蜡 | 第43-44页 |
| 2.2.8.3 染色 | 第44页 |
| 2.2.9 蛋白的表达与纯化 | 第44-46页 |
| 2.2.9.1 蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 2.2.9.2 His蛋白的纯化 | 第45页 |
| 2.2.9.3 GST蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.10 Western Blot | 第46-47页 |
| 2.2.11 蛋白互作实验 | 第47-51页 |
| 2.2.11.1 酵母双杂交 | 第47-48页 |
| 2.2.11.2 Pull-down | 第48-49页 |
| 2.2.11.3 BiFC | 第49-51页 |
| 2.2.12 硫氧还蛋白酶活性测定 | 第51页 |
| 2.2.13 线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性测定 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-78页 |
| 3.1 不同生态型拟南芥芽再生能力具有多样性 | 第52-54页 |
| 3.2 图位克隆鉴定DCC1为不同生态型拟南芥芽再生关键因子 | 第54-60页 |
| 3.2.1 Gu-0生态型拟南芥芽再生受到严重抑制 | 第54-55页 |
| 3.2.2 图位克隆鉴定DCC1为芽再生关键因子 | 第55-57页 |
| 3.2.3 不同生态型拟南芥中DCC1核苷酸序列连锁不平衡分析 | 第57-58页 |
| 3.2.4 DCC1功能缺失抑制芽再生 | 第58-60页 |
| 3.3 硫氧还蛋白DCC1定位于线粒体和叶绿体 | 第60-62页 |
| 3.4 DCC1与CA2互作 | 第62-64页 |
| 3.5 CA2突变抑制芽再生 | 第64-65页 |
| 3.6 DCC1与CA2均在愈伤组织内部表达 | 第65-67页 |
| 3.7 DCC1与CA2突变导致H_2O_2含量升高 | 第67-72页 |
| 3.8 外施H_2O_2严重抑制芽再生 | 第72-73页 |
| 3.9 外施谷胱甘肽恢复突变体表型 | 第73-76页 |
| 3.10 活性氧参与调控不同生态型拟南芥芽的再生 | 第76-78页 |
| 4 讨论 | 第78-82页 |
| 4.1 硫氧还蛋白DCC1是导致不同生态型拟南芥芽再生能力差异的关键因子 | 第78页 |
| 4.2 DCC1通过调节活性氧的水平影响芽的再生 | 第78-79页 |
| 4.3 不同生态型拟南芥活性氧水平与芽再生能力密切相关 | 第79-80页 |
| 4.4 不同生态型拟南芥芽再生分子机理调控的多样性 | 第80-82页 |
| 5 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
