| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-11页 |
| abstract | 第11-14页 |
| 第1章 绪论 | 第20-59页 |
| 1.1 生物大分子口服给药 | 第20-24页 |
| 1.1.1 生物大分子口服给药的主要障碍 | 第20-21页 |
| 1.1.2 生物大分子口服给药的主要策略 | 第21-24页 |
| 1.1.2.1 渗透增强剂 | 第21-22页 |
| 1.1.2.2 酶抑制剂 | 第22-23页 |
| 1.1.2.3 微纳米颗粒 | 第23页 |
| 1.1.2.4 结构修饰 | 第23-24页 |
| 1.2 生物大分子的结构修饰 | 第24-36页 |
| 1.2.1 脂质分子修饰 | 第24-30页 |
| 1.2.1.1 脂质分子概述 | 第24-25页 |
| 1.2.1.2 胆酸的肝肠循环 | 第25-27页 |
| 1.2.1.3 甾醇类脂质的吸收机理 | 第27-28页 |
| 1.2.1.4 脂肪酸的吸收机理 | 第28-30页 |
| 1.2.2 小肠寡肽转运蛋白1(PEPT1)及二肽修饰 | 第30-36页 |
| 1.2.2.1 小肠寡肽转运蛋白1(PEPT1) | 第30页 |
| 1.2.2.2 PEPT1的结构及作用机制 | 第30-33页 |
| 1.2.2.3 PEPT1应用于口服药物吸收 | 第33页 |
| 1.2.2.4 二肽作为PEPT1的底物 | 第33-36页 |
| 1.3 CpG寡核苷酸(CpGODN) | 第36-53页 |
| 1.3.1 CpG ODN的发现 | 第36-38页 |
| 1.3.2 CpG ODN的作用机理 | 第38-41页 |
| 1.3.2.1 CpG的非甲基化 | 第38页 |
| 1.3.2.2 TLR9受体 | 第38-39页 |
| 1.3.2.3 CpG诱导免疫效应的分子机理 | 第39-41页 |
| 1.3.3 CpG ODN的免疫调节作用 | 第41-45页 |
| 1.3.3.1 CpG ODN对B细胞的作用 | 第42页 |
| 1.3.3.2 CpG ODN对pDC的作用 | 第42-43页 |
| 1.3.3.3 CpG ODN对NK细胞的作用 | 第43页 |
| 1.3.3.4 CpG ODN对单核细胞/巨噬细胞的作用 | 第43-44页 |
| 1.3.3.5 CpG ODN对MDSC的作用 | 第44-45页 |
| 1.3.4 CpG ODN的结构、分类与功能 | 第45-48页 |
| 1.3.4.1 CpG ODN结构与活性 | 第45-46页 |
| 1.3.4.2 CpG ODN的分类 | 第46-48页 |
| 1.3.4.3 不同类型CpG ODN的免疫诱导差异 | 第48页 |
| 1.3.5 CpG ODN的应用 | 第48-53页 |
| 1.3.5.1 CpG ODN应用于感染性疾病 | 第48-49页 |
| 1.3.5.2 CpG ODN应用于过敏性疾病 | 第49页 |
| 1.3.5.3 CpG ODN应用于肿瘤 | 第49-53页 |
| 1.4 艾塞那肽(Exenatide) | 第53-56页 |
| 1.4.1 2型糖尿病 | 第53页 |
| 1.4.2 肠促胰岛素效应与GLP-1 | 第53-54页 |
| 1.4.3 艾塞那肽(Exentide) | 第54-56页 |
| 1.5 本论文的研究目的与研究内容 | 第56-59页 |
| 第2章 CpG ODN的脂质修饰 | 第59-93页 |
| 2.1 引言 | 第59-64页 |
| 2.1.1 Click Chemistry | 第59-60页 |
| 2.1.2 CuAAC反应及其原理 | 第60-62页 |
| 2.1.3 脂质分子选择 | 第62-64页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第64-67页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第64-65页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第65-66页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第66-67页 |
| 2.3 实验方法 | 第67-74页 |
| 2.3.1 脂质分子的叠氮化修饰 | 第67-70页 |
| 2.3.1.1 胆酸甲酯的叠氮修饰 | 第67-68页 |
| 2.3.1.2 胆固醇的叠氮修饰 | 第68-69页 |
| 2.3.1.3 脂肪酸的叠氮修饰 | 第69-70页 |
| 2.3.2 脂质分子与CpG ODN的Click反应 | 第70-72页 |
| 2.3.2.1 反应物储备液配置 | 第70-71页 |
| 2.3.2.2 反应进行 | 第71-72页 |
| 2.3.2.3 产物的纯化与表征 | 第72页 |
| 2.3.3 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE | 第72-74页 |
| 2.3.3.1 安装制胶装置 | 第72-73页 |
| 2.3.3.2 灌制5ml聚丙烯酰胺凝胶 | 第73页 |
| 2.3.3.3 上样与电泳 | 第73-74页 |
| 2.3.3.4 凝胶染色 | 第74页 |
| 2.3.4 CpG ODN的HPLC定量方法 | 第74页 |
| 2.4 实验结果 | 第74-92页 |
| 2.4.1 叠氮修饰胆酸甲酯的合成 | 第74-76页 |
| 2.4.2 叠氮修饰胆固醇的合成 | 第76-77页 |
| 2.4.3 叠氮修饰脂肪酸的合成 | 第77-85页 |
| 2.4.3.1 叠氮硬脂酸的合成 | 第77-80页 |
| 2.4.3.2 叠氮棕榈酸的合成 | 第80-81页 |
| 2.4.3.3 叠氮肉豆蔻酸的合成 | 第81-84页 |
| 2.4.3.4 叠氮月桂酸的合成 | 第84-85页 |
| 2.4.4 脂质修饰CpG ODN的合成 | 第85-88页 |
| 2.4.5 CpG ODN的HPLC定量方法 | 第88-92页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第92-93页 |
| 第3章 脂质和二肽修饰CpG ODN的体内外活性评价 | 第93-115页 |
| 3.1 引言 | 第93页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第93-96页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第93-94页 |
| 3.2.2 实验材料 | 第94-95页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第95-96页 |
| 3.2.4 主要试剂配制 | 第96页 |
| 3.3 实验方法 | 第96-102页 |
| 3.3.1 制备小鼠脾细胞悬液 | 第96-97页 |
| 3.3.2 CpG ODN与脾细胞悬液共孵育 | 第97页 |
| 3.3.3 ELISA测定小鼠脾细胞IL-6表达水平 | 第97-99页 |
| 3.3.4 小鼠OVA免疫和CpG ODN给药方案 | 第99-100页 |
| 3.3.5 ELISA检测小鼠血清抗体水平 | 第100-101页 |
| 3.3.6 CT-26荷瘤小鼠的建模 | 第101页 |
| 3.3.7 CT-26荷瘤小鼠的给药 | 第101页 |
| 3.3.8 CT-26荷瘤小鼠的脾细胞悬浮液制备 | 第101-102页 |
| 3.3.9 统计分析 | 第102页 |
| 3.4 实验结果 | 第102-112页 |
| 3.4.1 修饰后CpG ODN的体外活性 | 第102-105页 |
| 3.4.2 修饰后CpG ODN对小鼠血清特异性抗体表达水平的影响 | 第105-111页 |
| 3.4.3 LA修饰的CpG ODN对CT-26荷瘤小鼠的作用 | 第111-112页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第112-115页 |
| 第4章 二肽替换Exenatide的体内外活性评价 | 第115-148页 |
| 4.1 引言 | 第115-116页 |
| 4.1.1 设计二肽替换的Exenatide | 第115页 |
| 4.1.2 二肽替换Exenatide的序列 | 第115-116页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第116-119页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第116-117页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第117-118页 |
| 4.2.3 主要试剂配制 | 第118页 |
| 4.2.4 实验动物 | 第118-119页 |
| 4.3 实验方法 | 第119-128页 |
| 4.3.1 HPLC检测条件 | 第119页 |
| 4.3.2 二肽替换Exenatide的GLP-1R激动剂活性检测 | 第119-121页 |
| 4.3.3 溶剂沉淀法除蛋白提取多肽的方法筛选 | 第121页 |
| 4.3.4 Exenatide和HL-39的血浆稳定性 | 第121-122页 |
| 4.3.5 Exenatide和HL-39的小鼠胃肠道稳定性实验 | 第122页 |
| 4.3.6 灌制胶囊以及胶囊口服给药 | 第122-123页 |
| 4.3.7 小鼠血糖检测 | 第123-124页 |
| 4.3.8 二肽替换Exenatide的体内药效实验 | 第124页 |
| 4.3.9 HL-39的体内量效实验 | 第124-125页 |
| 4.3.10 HL-39与Gly-Sar体内的竞争抑制实验 | 第125页 |
| 4.3.11 大鼠在体单向肠灌流实验 | 第125-127页 |
| 4.3.11.1 肠灌流样品的HPLC测定方法 | 第125-126页 |
| 4.3.11.2 Exenatide和HL-39在肠内稳定性的考察 | 第126页 |
| 4.3.11.3 大鼠在体单向肠灌流实验 | 第126-127页 |
| 4.3.12 统计分析 | 第127-128页 |
| 4.4 实验结果 | 第128-144页 |
| 4.4.1 HPLC检测条件 | 第128-130页 |
| 4.4.2 二肽替换Exenatide的GLP-1R激动剂活性检测 | 第130-131页 |
| 4.4.3 溶剂沉淀法除蛋白提取多肽的方法筛选 | 第131-134页 |
| 4.4.4 Exenatide和HL-39的血浆稳定性 | 第134页 |
| 4.4.5 Exenatide和HL-39的小鼠胃肠道稳定性实验 | 第134-136页 |
| 4.4.6 二肽替换Exenatide的体内药效实验 | 第136-137页 |
| 4.4.7 HL-39的体内量效实验 | 第137-139页 |
| 4.4.8 HL-39与Gly-Sar体内的竞争抑制实验 | 第139-140页 |
| 4.4.9 大鼠在体单向肠灌流实验 | 第140-144页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第144-148页 |
| 第5章 总结与展望 | 第148-152页 |
| 5.1 研究内容总结 | 第148-150页 |
| 5.2 创新点 | 第150-151页 |
| 5.3 展望 | 第151-152页 |
| 参考文献 | 第152-178页 |
