| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第16-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-41页 |
| 1.1 肉食动物细小病毒概述 | 第17-26页 |
| 1.1.1 分类与病毒结构 | 第17-19页 |
| 1.1.2 受体研究 | 第19-20页 |
| 1.1.3 病毒复制 | 第20-21页 |
| 1.1.4 诊断方法 | 第21-26页 |
| 1.2 犬细小病毒 | 第26-32页 |
| 1.2.1 起源与进化 | 第26-27页 |
| 1.2.2 致病性 | 第27页 |
| 1.2.3 预防 | 第27-28页 |
| 1.2.4 抗原型 | 第28-29页 |
| 1.2.5 CPV-2c宿主范围和致病特性 | 第29-31页 |
| 1.2.6 疫苗类型 | 第31-32页 |
| 1.3 水貂肠炎病毒 | 第32-35页 |
| 1.3.1 概述 | 第32页 |
| 1.3.2 形态与理化特性 | 第32页 |
| 1.3.3 细胞培养 | 第32-33页 |
| 1.3.4 分子生物学特性 | 第33页 |
| 1.3.5 疫苗 | 第33-35页 |
| 1.4 RNA-Seq研究进展 | 第35-40页 |
| 1.4.1 转录组测序技术概述 | 第36页 |
| 1.4.2 RNA-Seq技术及优点 | 第36-37页 |
| 1.4.3 RNA-Seq的原理及步骤 | 第37页 |
| 1.4.4 RNA-Seq的应用 | 第37-38页 |
| 1.4.5 RNA-Seq面临的挑战 | 第38-40页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第40-41页 |
| 第二章 肉食动物细小病毒纳米PCR方法的建立及应用 | 第41-57页 |
| 2.1 材料 | 第41-42页 |
| 2.1.1 毒株与临床样本 | 第41页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第41-42页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 2.2 方法 | 第42-47页 |
| 2.2.1 病毒DNA提取 | 第42页 |
| 2.2.2 模板质粒的构建 | 第42-44页 |
| 2.2.3 纳米PCR引物设计 | 第44页 |
| 2.2.4 传统PCR | 第44-45页 |
| 2.2.5 纳米PCR引物的选择 | 第45页 |
| 2.2.6 纳米PCR退火温度的优化 | 第45页 |
| 2.2.7 纳米PCR质粒浓度的优化 | 第45-46页 |
| 2.2.8 纳米PCR引物浓度的优化 | 第46页 |
| 2.2.9 纳米PCR敏感性试验 | 第46页 |
| 2.2.10 纳米PCR特异性试验 | 第46页 |
| 2.2.11 纳米PCR临床应用试验 | 第46-47页 |
| 2.3 结果 | 第47-54页 |
| 2.3.1 质粒的构建 | 第47-48页 |
| 2.3.2 纳米PCR引物设计 | 第48-49页 |
| 2.3.3 纳米PCR退火温度的优化 | 第49-50页 |
| 2.3.4 纳米PCR质粒浓度的优化 | 第50页 |
| 2.3.5 纳米PCR引物浓度的优化 | 第50-51页 |
| 2.3.6 纳米PCR方法的建立 | 第51-52页 |
| 2.3.7 纳米PCR敏感性试验 | 第52页 |
| 2.3.8 纳米PCR特异性试验 | 第52页 |
| 2.3.9 纳米PCR临床应用试验 | 第52-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-57页 |
| 2.4.1 关于肉食动物细小病毒的讨论 | 第54-55页 |
| 2.4.2 关于纳米PCR技术的讨论 | 第55页 |
| 2.4.3 关于本方法的讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 犬细小病毒分子流行病学调查 | 第57-77页 |
| 3.1 材料 | 第58-59页 |
| 3.1.1 临床样品 | 第58页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第58-59页 |
| 3.2 方法 | 第59-62页 |
| 3.2.1 胶体金试纸条检测 | 第59页 |
| 3.2.2 DNA提取 | 第59-60页 |
| 3.2.3 纳米PCR检测 | 第60页 |
| 3.2.4 VP2基因扩增 | 第60-61页 |
| 3.2.5 NS1基因扩增 | 第61页 |
| 3.2.6 VP2及NS1基因序列拼接 | 第61-62页 |
| 3.2.7 VP2及NS1序列分析及系统发育树构建 | 第62页 |
| 3.3 结果 | 第62-74页 |
| 3.3.1 纳米PCR与试纸条检测结果比对 | 第62-63页 |
| 3.3.2 VP2及NS1基因扩增 | 第63-64页 |
| 3.3.3 VP2基因同源性分析 | 第64-66页 |
| 3.3.4 VP2基因系统发育树构建 | 第66-69页 |
| 3.3.5 NS1基因同源性分析 | 第69页 |
| 3.3.6 NS1基因系统发育树构建 | 第69-73页 |
| 3.3.7 VP2基因突变位点分析 | 第73-74页 |
| 3.3.8 NS1基因突变位点分析 | 第74页 |
| 3.3.9 CPV亚型分析 | 第74页 |
| 3.4 讨论 | 第74-77页 |
| 3.4.1 我国犬细小病毒流行情况 | 第74-75页 |
| 3.4.2 亚型之间交叉保护作用 | 第75页 |
| 3.4.3 病毒遗传进化 | 第75-77页 |
| 第四章 犬细小病毒变异株分离鉴定和免疫原性研究 | 第77-95页 |
| 4.1 材料 | 第77-78页 |
| 4.1.1 细胞 | 第77页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第77-78页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第78页 |
| 4.2 方法 | 第78-83页 |
| 4.2.1 样品处理 | 第78页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第78页 |
| 4.2.3 病毒分离 | 第78页 |
| 4.2.4 病毒鉴定 | 第78-81页 |
| 4.2.5 2c型病毒在犬体内分布研究 | 第81-82页 |
| 4.2.6 2c型病毒免疫原性研究 | 第82-83页 |
| 4.3 结果 | 第83-93页 |
| 4.3.1 病毒分离 | 第83页 |
| 4.3.2 形态学鉴定 | 第83-84页 |
| 4.3.3 血凝特性 | 第84-85页 |
| 4.3.4 病毒TCID50测定 | 第85页 |
| 4.3.5 理化性质鉴定 | 第85页 |
| 4.3.6 动物回归试验 | 第85-86页 |
| 4.3.7 PCR及VP2基因序列分析鉴定 | 第86-87页 |
| 4.3.8 IFA鉴定 | 第87页 |
| 4.3.9 PCR-RFLP鉴定 | 第87-89页 |
| 4.3.10 荧光定量PCR标准曲线及熔解曲线 | 第89页 |
| 4.3.11 不同组织病毒分布 | 第89-90页 |
| 4.3.12 病理学观察 | 第90-91页 |
| 4.3.13 免疫组化观察 | 第91页 |
| 4.3.14 BJ14-9 株免疫原性 | 第91-93页 |
| 4.4 讨论 | 第93-95页 |
| 第五章 水貂肠炎病毒分离鉴定及重组分析 | 第95-115页 |
| 5.1 材料 | 第95-96页 |
| 5.1.1 细胞 | 第95页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第95-96页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第96页 |
| 5.2 方法 | 第96-98页 |
| 5.2.1 样品处理 | 第96页 |
| 5.2.2 细胞培养 | 第96页 |
| 5.2.3 病毒分离 | 第96页 |
| 5.2.4 DNA提取 | 第96页 |
| 5.2.5 病毒鉴定 | 第96-97页 |
| 5.2.6 全基因组测序 | 第97-98页 |
| 5.2.7 重组分析 | 第98页 |
| 5.2.8 系统发育分析 | 第98页 |
| 5.3 结果 | 第98-113页 |
| 5.3.1 病毒分离 | 第98-99页 |
| 5.3.2 形态学观察 | 第99-100页 |
| 5.3.3 血凝特性 | 第100页 |
| 5.3.4 病毒TCID50测定 | 第100页 |
| 5.3.5 理化性质鉴定 | 第100页 |
| 5.3.6 动物回归试验 | 第100-101页 |
| 5.3.7 病理学观察 | 第101页 |
| 5.3.8 PCR鉴定 | 第101-102页 |
| 5.3.9 全基因组扩增 | 第102-103页 |
| 5.3.10 基因遗传进化分析 | 第103-108页 |
| 5.3.11 重组分析 | 第108-112页 |
| 5.3.12 突变位点分析 | 第112-113页 |
| 5.4 讨论 | 第113-115页 |
| 5.4.1 关于病毒分离的讨论 | 第113页 |
| 5.4.2 关于病毒基因重组的讨论 | 第113-115页 |
| 第六章 水貂肠炎病毒感染F81细胞转录组学分析 | 第115-136页 |
| 6.1 材料 | 第115-116页 |
| 6.1.1 细胞与毒株 | 第115页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第115-116页 |
| 6.1.3 主要仪器及软件 | 第116页 |
| 6.2 方法 | 第116-122页 |
| 6.2.1 细胞准备 | 第116页 |
| 6.2.2 样品总RNA的提取 | 第116-117页 |
| 6.2.3 分离mRNA及mRNA的打断 | 第117页 |
| 6.2.4 cDNA文库构建 | 第117-118页 |
| 6.2.5 数据处理与分析 | 第118-120页 |
| 6.2.6 荧光定量RT-PCR验证 | 第120-122页 |
| 6.3 结果 | 第122-134页 |
| 6.3.1 RNA质量评估 | 第122-124页 |
| 6.3.2 转录组数据的质量评估 | 第124页 |
| 6.3.3 参考基因组的比对分析 | 第124页 |
| 6.3.4 基因表达的饱和度分析 | 第124-126页 |
| 6.3.5 转录组中已知基因表达的水平分析 | 第126-127页 |
| 6.3.6 转录组中差异基因的表达分析 | 第127-129页 |
| 6.3.7 转录组中差异基因的富集分析 | 第129-131页 |
| 6.3.8 荧光定量RT-PCR验证差异基因 | 第131-134页 |
| 6.4 讨论 | 第134-136页 |
| 6.4.1 细小病毒与癌症发生 | 第134-135页 |
| 6.4.2 细小病毒促进细胞凋亡 | 第135-136页 |
| 第七章 全文结论 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 作者简历 | 第149-151页 |
| 附录 | 第151-152页 |