| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 异源表达非核糖体肽类化合物的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 非核糖体肽类化合物概括 | 第12-13页 |
| 1.1.2 非核糖体肽的异源生物合成研究 | 第13-14页 |
| 1.1.3 常见的微生物异源表达系统 | 第14-15页 |
| 1.2 白僵菌素的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 白僵菌素概况 | 第15-18页 |
| 1.2.2 白僵菌素的生物合成 | 第18-19页 |
| 1.3 本论文的主要内容与研究意义 | 第19-22页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-32页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 引物 | 第23-25页 |
| 2.1.3 培养基和常用试剂配制 | 第25-29页 |
| 2.1.4 试剂和试剂盒 | 第29-30页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第30-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-42页 |
| 2.2.1 目的基因片段的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.2 DNA的琼脂糖凝胶电泳实验 | 第33-34页 |
| 2.2.3 目的基因片段的回收纯化 | 第34页 |
| 2.2.4 DNA的酶切与Gibson Assembly反应体系 | 第34-35页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第35-36页 |
| 2.2.6 质粒DNA的小量提取 | 第36页 |
| 2.2.7 乙醇沉淀回收DNA | 第36-37页 |
| 2.2.8 构巢曲霉孢子的保藏与孢子悬液的制备 | 第37页 |
| 2.2.9 构巢曲霉原生质体的制备与转化 | 第37-38页 |
| 2.2.10 构巢曲霉基因组的小量抽提 | 第38-39页 |
| 2.2.11 白僵菌素的摇瓶发酵工艺 | 第39-40页 |
| 2.2.12 白僵菌素发酵液的萃取与旋蒸 | 第40页 |
| 2.2.13 白僵菌素发酵液的HPLC检测 | 第40-42页 |
| 第三章 白僵菌素在构巢曲霉中的异源表达 | 第42-50页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 结果与分析 | 第42-48页 |
| 3.2.1 白僵菌素异源表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.2 构巢曲霉异源表达转化子的筛选 | 第44-45页 |
| 3.2.3 白僵菌素在构巢曲霉中的LC-MS鉴定 | 第45-48页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 重构启动子增加白僵菌素产量 | 第50-62页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 结果与分析 | 第50-61页 |
| 4.2.1 不同启动子异源表达载体的构建 | 第50-55页 |
| 4.2.2 白僵菌素异源转化子的筛选 | 第55-56页 |
| 4.2.3 不同启动子表达对白僵菌素产量的影响 | 第56-61页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 白僵菌素发酵工艺的优化 | 第62-68页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 结果与分析 | 第62-66页 |
| 5.2.1 添加滑石粉来提高白僵菌素的产量 | 第62-64页 |
| 5.2.2 白僵菌素表达菌株TYAH2生长曲线的摸索 | 第64页 |
| 5.2.3 优化发酵条件来提高白僵菌素的产量 | 第64-66页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第66-68页 |
| 第六章 总结与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |